淋病是我國發病率最高的性病，已成為重大公共衛生問題。防止淋病流行的 關鍵是及時診斷和治療。培養法一直是診斷淋病奈瑟菌感染的黃金標準，至今仍是用於常規 測定的唯一方法。淋病奈瑟菌(NG)分離培養時對培養基的營養要求非常高，泌尿道樣品中有 多種雜菌，雜菌在富有營養的培養基上旺盛的生長，嚴重影響了NG培養法的陽性率。近年世 界 衛生組織(WHO)推薦敏感性和選擇性更好的改良NG選擇性培養基(MTM)來培養分離淋病奈瑟菌 。我們根據美國國立臨床實驗室標準化委員會(NCCLS)文件［1］和有關資料［ 2］，研製MTM培養基，並在臨床實驗室的應用中得到良好評估。
材料和方法
一、 試劑
1.對照MTM培養基 OXOID公司產品，按說明書配製。
2.NG 基礎培養基 幹粉 購買上海伊華醫學科技有限公司NG幹粉，加入適量無水磷酸氫二鈉，研磨混 勻後分裝 ，每瓶15g，使MTM最終pH為7.2。
3.雜菌抑製劑 三甲氧苄二氨嘧啶、多粘菌素、製黴 菌素、萬古黴素均購自Sigma。無菌操作溶解後分裝於2 ml 安瓿，內含三甲氧苄二氨嘧啶 1 .5 mg、多粘菌素B 12500 IU、製黴菌素3750 IU、萬古黴素0.9 mg，冷凍 幹燥。每300 ml NG基礎培養基加入一支安瓿複溶後的抑菌劑。
4.營養添加劑 胱氨酸、鳥嘌呤、維生素B 1、PABP、維生素B12、輔羧酶、輔酶Ⅰ(NAD)、腺嘌呤、穀氨酰胺、葡萄糖、硝 酸鐵 、半胱氨酸為國產試劑，混合溶解後過濾除菌，分裝於2 ml 安瓿，無菌試驗合格後冷凍幹 燥。每300 ml NG基礎加入一支安瓿複溶後的營養添加劑。
5.菌種來源 淋病奈瑟菌ATCC 4 3070、大腸杆菌ATCC 25922、銅綠假單胞菌ATCC 27853、金黃色葡萄球菌ATCC 25923；腦膜 炎奈瑟菌、卡他莫拉菌、藤黃微球菌、表皮葡萄球菌、A 群鏈球菌、草綠色鏈球菌、肺炎鏈 球菌、傷寒沙門菌、肺炎克雷伯菌、粘質沙雷菌、奇異變形杆菌、產氣腸杆菌、異型枸櫞酸 杆菌、溫和氣單胞菌、洛菲不動杆菌、枯草杆菌、白喉棒狀杆菌、白色念珠菌均為WHO微生 物質量控製菌株。
二、 MTM配製方法 小瓶中NG幹粉倒入300 ml蒸餾水中， 在三角燒瓶內混合後放置10 min，高壓滅菌115℃ 15 min。冷卻至56℃左右加15～30 ml無菌脫纖維羊血及營養添加劑和雜菌抑製劑各一安瓿，混勻後傾注平板。
三、 培養條件 37℃，5% CO2環境下培養24～48 h。環境應潮濕，無濕度控製的老式CO2 孵育箱 ，應在箱底放一水盤。燭缸中的介質水氣的蒸發可提供良好的濕度，但不能用彩燭。
結 果
一、 NCCLS和WHO標準菌株的培養結果 按培養基鑒定的國際規定［ 3］，所有待測菌株均分別懸浮於胰腖大豆肉湯(TSB)使成為0.5麥氏單位懸液，將它和10 0倍稀釋後的此懸液分別接種二種MTM培養基，培養24 h。淋病奈瑟菌、腦膜炎奈瑟菌、卡他 莫拉菌在本文MTM和OXOID公司的MTM上均有良好生長，菌落大小、形態與OXOID公司的MTM上 的相同。除上述三種細菌外，隻有解乳糖奈瑟菌也可能在MTM上生長(由於缺乏此標準菌株， 本文未測試該菌)［2］。藤黃微球菌、金黃色葡萄球菌、表皮葡萄球菌、A群鏈球菌 、草綠色鏈球菌、肺炎鏈球菌、大腸杆菌、傷寒沙門菌、肺炎克雷伯菌、粘質沙雷菌、奇異 變形杆菌、產氣腸杆菌、異型枸櫞酸杆菌、銅綠假單胞菌、溫和氣單胞菌、洛菲不動杆菌、 枯草杆菌、白喉棒狀杆菌、白色念珠菌在本MTM培養基上二種菌濃度均受完全抑製，情況和O XOID公司的MTM上呈現的抑製結果相同。
以上結果完全符合NCCLS對MTM的質量控製要求： 淋病奈瑟菌和腦膜炎奈瑟菌生長；奇異變形杆菌、大腸杆菌、幹燥奈瑟菌、白色念珠菌、表 皮葡萄球菌被抑製或部分抑製［3］。
二、 與OXOID公司的MTM臨床應用 比較 上海市三家醫院臨床實驗室同時使用二種MTM培養187例女子宮頸內或男子泌尿道處采 集的樣品，二者結果完全相同，有23例培養出淋病奈瑟菌，164例呈陰性結果。
討 論
三甲氧苄二氨嘧啶能抑製變形杆菌屬細菌的生長，尤其對其蔓延性生長有極理想的抑製作 用。從抑菌劑中抽去該試劑，對變形杆菌的抑製作用立刻消失，它的遷移性生長完全掩蓋了 淋病奈瑟菌的生長。盡管三甲氧苄二氨嘧啶價格昂貴，僅此一項成本就接近於MTM其他所有 材料的價格，但還是不應該從抑菌劑中省略，要檢查所用的MTM中是否有該試劑存在，隻要 用奇異變形杆菌鑒定即可。
本文研製的MTM和國際著名的OXOID公司原裝MTM檢出淋病奈瑟 菌的結果完全符合，包裝量小，配製方便，適合基層單位使用。
作者：葛平，徐蓉，呂繩凱《上海醫學檢驗雜誌》
參考文獻
［1］NCCLS:January 1999 M100-S9 ［S］. P 88.
［2］呂繩凱，儲迅濤．淋病的實驗室診斷［J］. 中華醫學檢驗雜誌，1998 ；21(3)∶185.
［3］呂繩凱，潘雲華，馬子行．NCCLS的商品微生物培養基的質量保證［J］. 上海醫學檢驗雜誌，1998；13(2)∶117.
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