用組織培養法繁殖葡萄,可達到優良葡萄快速育苗的目的,以滿足生產需要。同時也是工廠化育苗和脫毒苗木快速繁殖的重要手段,並能常年進行,縮短了苗木繁殖周期,加快新品種的推廣應用。
一、試管苗的初代培養
葡萄組織培養初代培養,其繁殖材料多取自大田,常帶有大量細菌和黴菌,必須進行消毒方可獲得無菌材料。材料采集在前三天無雨的晴天上午進行,取帶腋芽的葡萄半木質嫩莖,剪取後立即拿入室內,先用自來水反複衝洗,除去病蟲枝、殘傷枝,減除大葉片,裝入廣口瓶進行消毒。用無菌操作技術,倒入無菌水浸泡和衝洗,倒去無菌水,加入0.1%升汞(內加2%的95%酒精)浸沒材料,並劇烈搖動6分鍾~9分鍾,剪去受傷端麵,剪成單芽莖段,接入培養基中。每瓶插一段,正插入內。標號後放到培養室培養,一周後檢查,如未汙染,基本上不會再汙染。通過對美人指、早紅提等品種的生產,取得了90%以上無汙染成苗率。
二、試管苗的繼代繁殖
對初代培養合格或引進的試管苗,一般采用MS、B5、GS等培養基,具體做法如下:
1.穿好工作服,戴上工作帽,用潔淨的水洗手,再用75%的酒精棉球擦手消毒。
2.取無菌原種苗瓶放於超淨台,用75%酒精棉球仔細擦試包頭紙及苗瓶外體,並解開包頭紙捆紮線繩。
3.將彎剪刀、槍狀鑷子浸入75%酒精中,用時取出在火焰上燒15秒~30秒,涼冷備用。
4.將無菌原種苗瓶的包頭紙連同棉塞一同拔下,放在超淨台一旁,瓶口在火焰上燒5秒~10秒,用冷卻的剪刀將瓶內小苗剪成單芽莖段,下端稍長,上端較短,但剪口距芽至少0.5厘米以上。母株基部要留一芽,使其再發。剪下的單芽莖段,用無菌鑷子逐個夾出,放入新的培養基瓶內,並使葉子和芽露出培養基上方。150毫升三角瓶插5個左右莖段,插完後將瓶口在火焰上轉動燒一遍,旋好棉塞和包上包頭紙,用繩紮好,注明名稱和時間等。如此反複的接好所有苗子,並放到培養室。一般每月轉接增殖3次。
三、試管苗的培養
將接種後的培養苗瓶,放在培養室的培養架上,培養室晝夜溫度保持在22℃~28℃,新轉接的苗瓶應放在培養架上層,上層溫度略高易於生根。培養室的濕度以70%為宜,光照2000~3000勒克斯的日光燈。
四、移栽
時期多在冬季或春季進行。
1.光培煉苗。培養室培養的試管苗生長達瓶口,有3枚~4枚正常葉片時,根係生長良好,連同培養瓶轉入溫室或大棚內,逐步去掉瓶塞,放在幹淨的溫室中,在2萬~4萬勒克斯的自然光下煉苗5天~7天,當瓶口長出油亮的葉片,幼莖變淡紅色時即可出瓶。
2.沙培煉苗。最好備有下鋪電熱線並能調節溫度的沙床,使床溫維持在25℃左右。以0.6厘米間距布置電熱線,其上鋪墊2厘米的土,壓平,再鋪8厘米~10厘米的幹淨細河沙,濕度以12%左右,即手捏成團落地能散。
清晨或傍晚,將培養瓶內的幼苗輕輕倒出,洗掉根上附著的培養基,栽入沙床,3厘米~4厘米株距,8厘米~10厘米行距,每平方米大約栽400苗~500苗。栽入沙床後,蓋好小拱棚,最初3天,棚內溫度保持在25℃左右,最高不超過30℃,最低不低於20℃。相對濕度保持在80%~95%;光照0.7萬~1萬勒克斯。6天~7天後,拆除臨時小拱棚。
3.溫室營養袋煉苗。經沙培後的合格苗,小心挖出,在空氣濕度不低於70%,溫度20℃~25℃,無直射光下,栽入肥土:沙:腐熟有機肥為1:1:0.2的營養缽中,最初幾天對溫、光、濕的管理同沙培苗相同。
4.大田苗圃移栽。選土質疏鬆肥沃,排灌水方便,距溫室較近且日照良好的地塊作苗圃,將營養袋苗移栽即可。小苗有3個月的生長期,並及時打掉副梢,促進枝芽老化成熟,達到合格優質苗。
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