用組織培養法繁殖葡萄, 可達到優良萄萄快速育苗的目的, 以滿足生產需要。同時也是工廠 化育苗和脫毒苗木快速繁殖的重要手段, 並能常年進行, 縮短了苗木繁殖周期,加快新品種的推廣應用。
1 試管苗的初代培養
植物組織培養是無菌地培養植物的技術, 因此, 離體進行葡萄試管繁殖, 脫除病毒,胚胎花藥和子房培養, 細胞和原生質培養, 離體保存等, 都必須使用無菌材料。葡萄組織初代 培養, 其繁殖材料多取自大田, 常帶有大量細菌和黴菌,必須進行消毒方可獲得無菌材料 。材料采集在組培前3d的晴天上午, 取帶腋芽的葡萄半木質嫩莖, 剪取後立即拿入室內 , 先用自來水反複衝洗, 除去病蟲枝、傷殘枝, 減除大葉片, 裝入廣口瓶進行消毒。用無菌 操作技術, 倒入無菌水浸泡和衝洗; 倒去無菌水, 加入0.1%升汞(內加2%的95%酒精)浸泡材 料, 並劇烈搖動6～9min, 剪去受傷端麵, 剪成單芽莖段, 接入培養基中。每瓶一段, 正插入內。標號後放到培養室培養, 一周後檢查, 如未汙染, 基本上不會再汙染。通過對美人指、早紅提等品種的生產, 取得了90%以上無汙染成苗率。
2 試管苗的繼代繁殖
對初代培養合格或引進的試管苗, 一般采用MS、B5、GS等培養基, 具體做法如下:
(1)穿好工作服, 戴上工作帽, 用潔淨的水洗手, 再用75%的酒精棉球擦手消毒。
(2)取無菌原種苗瓶放於超淨台, 用75%酒精棉球仔細擦試包頭紙及苗瓶外體,並解開包頭紙捆紮線繩。
(3)將彎剪刀、槍狀鑷子浸入75%酒精中, 用時取出在火焰上澆15～30s, 晾涼備用。
(4)將無菌原種苗瓶的包頭紙連同棉塞一同拔下, 放在超淨台一旁, 瓶口在火焰上燒5～10s , 用冷卻的剪刀將瓶內小苗剪成單芽莖段, 下端稍長, 上端較短, 但剪口距芽至少0.5cm 以上。母株基部要留一個芽, 使其再發。剪下的單芽莖段,用無菌鑷子逐個夾出, 放入新的 培養基瓶內, 並使葉子和芽露出培養基。150ml三角瓶插5個左右莖段, 插完後將瓶口在火 焰上轉動燒一圈, 旋好棉塞和包上包頭紙, 用繩紮好, 注明品種名稱和時間等。如此反複的 接好所有苗子,並放到培養室。一般每月轉接增殖3次。
3 試管苗的培養
將接種後的培養苗瓶, 放在培養室的架上, 培養室晝夜溫度保持在22～28℃, 新轉接的 苗瓶應放在培養架上層, 上層溫度略高易於生根。濕度以70%為宜,光照2000～3000lx的日光燈。
4 移栽
移栽多在冬季或春季進行。
(1) 光培煉苗。培養室培養的試管苗生長達瓶口, 有3～4枚正常葉片時, 根係生長良 好, 連 同培養瓶轉入溫室或大棚內, 逐步去掉瓶塞, 放在幹淨的溫室中, 2～4萬lx的自然光下 煉 苗5～7 d, 當瓶口長出油亮的葉片, 幼莖變淡紅色時即可出瓶。
(2)沙培煉苗。最好備有下鋪電熱線並能調節溫度的沙床, 使床溫維持在25℃左右。以0.6 c m間距布置電熱線, 其上鋪墊2 cm的土, 壓平, 再鋪8～10 cm的幹淨細河沙, 濕度在12%左 右 , 即手捏成團落地能散。
清晨或傍晚, 將培養瓶內的幼苗輕輕倒出, 洗掉根上附著的培養基, 栽入沙床, 株 距3～4 cm, 行距8～10 cm, 每平方米大約栽400～500株苗。栽入沙床後, 蓋好小拱棚, 最初3 d, 棚 內溫度保持在25℃左右, 最高不超過30℃, 最低不低於20℃。相對濕度保持在80%～95%; 光 照0.7～10萬lx。6～7 d, 拆除臨時小拱棚。
(3)溫室營養袋煉苗。經沙培後的合格苗, 小心挖出, 在空氣濕度不低於70%, 溫度20～25℃ , 無直射光下, 栽入肥土: 沙: 腐熟有機肥為1∶1∶0.2的營養缽中。最初幾天對溫、光、濕的管理與沙培苗相同。
(4)大田苗圃移栽。選疏鬆肥沃排灌水方便、距溫室較近且日照良好的地塊作苗 圃, 將營養 袋苗移栽苗圃即可。小苗有3個月的生長期, 並及時打掉副梢, 促進枝芽老化成熟, 達到合格優質苗。
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