消毒滅菌要求
微生物檢測用的玻璃器皿、金屬用具及培養基、被汙染和接種的培養物等，必須經滅菌後方能使用。
（一）幹熱和濕熱高壓蒸氣鍋滅菌方法
1．滅菌前準備
（1）所有需要滅菌的物品首先應清洗晾幹，玻璃器皿如吸管、平皿用紙包裝嚴密，如用金屬筒應將上麵通氣孔打開。
（2）裝培養基的三角瓶塞，用紙包好，試管蓋好蓋，注射器須將管芯抽出，用紗布包好。
2．裝放
（1）幹熱滅菌器：裝放物品不可過擠，且不能接觸箱的四壁。
（2）大型高壓蒸氣鍋：放置滅菌物品分別包紮好，直接放入消毒筒內，物品之間不能過擠。
3．設備檢查
（1）檢查門的開關是否靈活，橡皮圈有無損壞，是否平整。
（2）壓力表蒸氣排盡時是否停留在零位，關好門和蓋，通蒸氣或加熱後，觀察是否漏氣，壓力表與溫度計所標示的狀況是否吻合，管道有無堵塞。
（3）對有自動電子程序控製裝置的滅菌器，使用前應檢查規定的程序，是否符合於進行滅菌處理的要求。
4．滅菌處理
(1)幹熱滅菌法：此法適應於在幹熱情況下，不損壞、不變質、不蒸發的物品、較常用於玻璃器皿、金屬製品、陶瓷製品等的滅菌。
a. 器械器皿應清洗後再幹烤，以防附著在表麵的汙物炭化。
b. 滅菌時安放物品不能過擠，不要直接接觸底和箱壁，物品之間留有空隙。
c.滅菌時將箱門關緊，接上電源，先將排氣孔打開約30min，排除滅菌器中的冷空氣，溫度升至160℃調節指示燈，維持1.5 –2h。
d.滅菌完畢後或溫度升溫過程中，須在60℃以下才能打開箱門。
(2) 手提式高壓鍋或立式壓力蒸氣滅菌器的使用應按下列步驟進行：
a. 手提式高壓鍋在主體內加入3L清水，立式高壓鍋加水16L（重複使用時應將水量補足，水變混濁需更換）。
b. 手提式壓力鍋將頂蓋上的排氣管插入消毒桶內壁的方管中（無軟管或軟管鏽蝕破裂的滅菌器不得使用）。
c. 蓋好頂蓋擰緊，勿使漏氣；置滅菌器於火源上加熱，立式壓力鍋通上電源，並打開頂蓋上的排氣閥放了冷氣（水沸騰後排氣10-15min）。
d. 關閉排氣閥，使蒸氣壓上升到規定要求，並維持規定時間（按滅菌物品性質與有關情況而定）。
e. 達到規定時間後，對需幹燥的物品，立即打開排氣閥排出蒸氣，待壓力恢複到零時，自然冷卻至60℃後開蓋取物，如為液體物品，不要打開排氣閥，而應立即將鍋去除熱源，待自然冷卻，壓力恢複至零，溫度降到60℃以下再開蓋取物，以防突然減壓液體劇烈沸騰或容器爆破。
(3) 臥式壓力鍋蒸氣滅菌器的使用按下列步驟進行：
a. 關緊鍋門，打開進氣閥，將蒸氣引入夾層進行預熱，夾層內冷空氣經阻氣器自動排出。
b. 夾層達到預定溫度後，打開鍋室進氣閥，將蒸氣引入鍋室，鍋室內冷空氣經鍋室阻氣器自動排出。
c. 待鍋室達到規定的壓力與溫度時，調節進氣閥，使保持恒定至規定時間。
d. 自然或人工降溫至60℃再開門取物，不得使用快速排出蒸氣法，以防突然降壓，液體劇烈沸騰或容器爆破。
e.使用自動程序控製式壓力蒸氣滅菌器，在放好物品關緊門後，應根據物品類別按動相應開關，以便按要求程序自動進行滅菌，滅菌時必須利用附設儀表記錄溫度與時間以備查，操作要求應嚴格按照廠家說明書進行。
5．滅菌溫度與時間
(1) 幹熱滅菌器滅菌溫度160℃，1.5-2h。
(2) 壓力蒸氣滅菌鍋滅菌溫度與時間見表34-1。
表34-1
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物品 |
滅菌時間，min |
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115℃ |
121℃ |
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不含糖等耐熱物質培養基 |
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15 |
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含糖類等不耐熱培養基 |
15-20 |
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染菌培養物 |
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30 |
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器械器皿 |
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30 |
（二）間歇滅菌方法
1．滅菌方法係利用不加壓力的蒸氣滅菌，某些物質經高壓蒸氣滅菌容易破壞，可用此法滅菌。
（1）將欲滅菌物品置於鍋內，蓋上頂蓋，打開排水口，使器內餘水排盡。
（2）關閉排水口，打開進氣門，根據需要消毒10～20min.
（3）滅菌完畢關閉進氣門，取出物品待冷至室溫溫度，放入37℃溫箱過夜，次日仍按上述方法消毒，如此三次，即可達到滅菌目的。
2．血清凝固器使用方法，培養基中含有血清或雞蛋特殊成份時，因高熱會破壞其營養成份，故用低溫，可使血清凝固，又可達到滅菌目的。
（1）在使用該法滅菌的血清等分裝時，需嚴格遵守無菌操作，試管、平皿也經滅菌後使用。
（2）將培養基按要求使成斜麵或高層，加足水後，接上電源，升溫75～90℃1h滅菌，放37℃溫箱過夜，再如此滅菌三次。
3. 煮沸消毒：可用煮鍋或煮沸消毒器，水沸騰後再煮5～15 min，也可在水中加入2﹪石炭酸煮沸5 min，加入0.02﹪甲醛,80℃煮60 min均可達到滅菌目的,但選用煮沸消毒的增消劑時,應注意對物品的腐蝕性.
4. 滅菌處理:滅菌後物品,按正常情況已屬無菌,從滅菌器中取出應仔細檢查放置,以免再度汙染.
(1) 物品取出,隨即檢查包裝的完整性,若有破壞或棉塞脫掉,不可作為無菌物品使用.
(2) 取出的物品,如為包裝有明顯的水浸者,不可作為無菌物品使用.
(3) 培養基或試劑等,應檢查是否符合達到滅菌後的色澤或狀態,未達到者應廢棄.
(4) 啟閉式容器,在取出時應將篩孔關閉.
(5) 取出的物品掉落在地或誤放不潔這處,或沾有水液,均視為受到汙染,不可作為無菌物品使用.
(6) 取出的合格滅菌物品,應存放於貯藏室或防塵櫃內,嚴禁與未滅菌物品混放.
(7) 凡屬合格物品,應標有滅菌日期及有效期限.
(8) 每批滅菌處理完成後,記錄滅菌品名、數量、溫度、時間、操作者。
有毒有菌汙物處理要求
微生物實驗所用實驗器材、培養物等未經消毒處理，一律不得帶出實驗室。
1. 經培養的汙染材料及廢棄物應放在嚴密的容器或鐵絲筐內，並隼中存放在指定地點，待統一進行高壓滅菌。
2. 經微生物汙染的培養物，必須經121℃30 min高壓滅菌。
3. 染菌後的吸管，使用後放入5﹪煤酚皂溶液或石炭酸液中，最少浸泡24h（消毒液體不得低於浸泡的高度）再經121℃30 min高壓滅菌。
4. 塗片染色衝洗片的液體，一般可直接衝入下水道，烈性菌的衝洗液必須衝在燒杯中，經高壓滅菌後方可倒入下水道，染色的玻片放入5﹪煤酚皂溶液中浸泡24 h後，煮沸洗滌。做凝隼試驗用的玻片或平皿，必須高壓滅菌後洗滌。
5. 打碎的培養物，立即用5﹪煤酚皂溶液或石炭酸液噴灑和浸泡被汙染部位，浸泡半小時後再擦拭幹淨。
汙染的工作服或進行烈性試驗所穿的工作服、帽、口罩等，應放入專用消毒袋內，經高壓滅菌後方能洗滌。
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