【關鍵詞】 複方氨基酸注射液；動態比濁法；細菌內毒素；幹擾試驗；鱟試劑
１ 材料與方法
１．１ 材料與試劑
細菌內毒素檢查用水(BET水)(批號030510，規格10 ｍｌ／支，廈門鱟試劑廠)；鱟試劑(動態濁度法鱟試儀專用，批號030725，規格015 ｍｌ／支，廈門鱟試劑廠)；細菌內毒素工作品(批號030610，規格10 EU／支，廈門鱟試劑廠)；複方氨基酸注射液(3AA)批號200304012，200304121，200305093，200305161，200306222，規格250 ｍｌ／瓶，湖北峰江)；BET３２型細菌內毒素測定儀(天津大學無線電廠)；ZH２自動漩渦混合器(天津藥典標準儀器廠)；實驗所用玻璃器皿經鉻酸洗液處理後，再經250℃幹烤1h以上，除去外源性內毒素。
１．２ 方法與結果
１．２．１ 實驗條件：檢測溫度為37℃；檢測波長為660 ｎｍ；最長檢測時間為8400 ｓ。
１．２．２ 細菌內毒素限值(L)的確定［１］：按公式Ｌ＝Ｋ／Ｍ，Ｋ為靜脈注射給藥的細菌內毒素閾劑量＝50ＥＵ·ｍｌ－１，Ｍ為病人每千克體重每小時最大給藥劑量。本文采用家兔熱原劑量M＝10ｍｌ·ｋｇ－１·ｈ－１，則複方氨基酸注射液(3AA)細菌內毒素限值(L)為0.5ＥU·ｍｌ－１。
１．２．３ 標準曲線製備及可靠性：取細菌內毒素工作品1支加BET水10 ｍｌ，用封口膜封口，置漩渦混合器上混合15 ｍｉｎ，進行10倍稀釋，然後2倍稀釋，且各步置漩渦混合器上混合30 ｓ，使其最終內毒素濃度為1.0，0.5，0.25，0.125，0.0625，0.0312，0.0156ＥＵ·ｍｌ－１稀釋係列，各取0.15ｍｌ分別加到預先加有0.15ｍｌ鱟試劑的反應管內，混合均勻，插入濁度儀進行檢測。每一濃度平行3管，同時用BET水做2管陰性對照(NC)，結果見表1。表1 標準曲線的可靠性內毒素濃度（略）
１．２．４ 供試品溶液配製及幹擾試驗：①供試品最大有效稀釋倍數(MVD)計算：按公式ＭＶＤ＝Ｌ×Ｃ／λ，Ｌ為複方氨基酸注射液(3AA)的內毒素限值0.5 EU·ｍｌ－１，λ為標準曲線最低濃度0.0156 EU·ｍｌ－１，Ｃ為供試液濃度。當L以EU·ｍｌ－１表示時，C為10 ml·mL-1得樣品試驗時最大有效稀釋倍數(MVD)為32倍。②幹擾預試驗：將3批複方氨基酸注射液(3AA)用BET水稀釋為2、4、6、8倍溶液，每個濃度分別取0.15 ｍｌ加0.15 ｍｌ鱟試劑作為樣品檢查(Eｔ）；同時另取5管，進行同樣倍數稀釋，並在各濃度溶液中強化0.125 ＥＵ·ｍｌ－１的內毒素作為樣品陽性對照液(Es)，分別取上述各液0.15 ｍl加入預先加有0.15 ｍl鱟試劑的反應管內進行檢測，每個濃度重複3管，並設陰性對照，分別測定各濃度樣品液及陽性樣品的內毒素含量Et和Es，按下式計算回收率(R)。R=(Es－Ｅt)／0.0125×100％，結果見表2。表2 供試品幹擾預實驗樣品批號稀釋倍數Et(略）
根據中國藥典2000年版規定，如果內毒素的回收率在50％～200％之間時，則供試品在該試驗條件下不存在幹擾因素。表2結果表明，3批供試品在各倍稀釋時均無幹擾作用，4倍時回收率較好，可作為定量檢測的濃度。
１．２．5 供試品幹擾試驗與家兔法檢查：取5批複方氨基酸注射液用BET水稀釋4倍，並製備樣品陽性對照，每個濃度重複3管，並做陰性對照，放入檢測儀檢測，同時進行家兔法檢查，結果陰性對照陰性，其他數據見表3。表3 幹擾試驗樣品批號稀釋倍數Et(略）
2 討論
實驗結果表明，各倍稀釋液對鱟試劑不存在幹擾作用，4倍可以得到很好的回收率，且動態濁度法進行細菌內毒素定量檢測，使用計算機全過程監控，樣品反映情況能在顯示屏上直觀地反映出來，與傳統的家兔法相比，避免了動物個體差異及人為判斷誤差所造成的假陽性或假陰性結果，具有靈敏、簡便、結果準確等優點，其檢測結果與家兔熱原檢查結果一致。因此，用動態濁度法檢測複方氨基酸注射液(3AA)中細菌內毒素含量是可行的。
作者：宋威 賀德勇 《濱州醫學院學報》 2006 年 2 月 第 29 卷 第 1 期
參 考 文 獻
１． 夏振民．藥品細菌內毒素檢查的限值［Ｊ］．藥物分析雜誌，１９９５，１５（３）：５４
２． 中國藥典．二部［Ｓ］．２０００（附錄）. 204
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