近年來，微生物引起的突發性公共衛生事件屢有發生。疾病預防係統細菌檢驗的正確性和可靠性，就直接影響著廣大人民群眾身體健康。為了給疾病預防和控製提供及時、準確的檢驗報告，室間質評作為提高微生物實驗室總體水平的一個重要手段越來越引起重視。我科從2001年起參加了陝西省臨床檢驗中心每年兩次的微生物檢驗室間質量的評價工作，現將5年來的質評結果總結分析如下。
1 材料與方法
1.1 質控菌種 真空幹燥菌種50株，由陝西省臨床檢驗中心提供。
1.2 質控目的 對未知菌種做出鑒定。
1.3 試劑 所用成品培養基購於上海市疾病預防控製中心，中國腹瀉病控製上海試劑供應研究中心；微量生化管購於杭州微生物試劑廠；沙門菌診斷血清、誌賀菌診斷血清、腸道致病性大腸埃希菌診斷血清、腸道侵襲性大腸埃希菌診斷血清、大腸菌O157診斷血清均購於衛生部蘭州生物製品研究所，在有效期內使用。
1.4 評價 （1）要求所報細菌必須到種或型，方可得分，即完全正確PT100％，否則PT為0；時間為10天，以郵戳為準。（2）每次得分（PT）計算：實驗室回報正確細菌數/實際細菌數100％或者是各株細菌PT的平均值。（3）評價分為：不及格PT<60％，及格PT≥60％，良好PT≥80％，優秀PT≥90％。
2 檢驗步驟［1］
2.1 無菌操作開啟真空幹燥管，加入無菌生理鹽水0.2ml，反複抽吸使成均勻混懸液。
2.2 分離培養 根據標本來源不同，所涉及的菌屬不同，選擇相適應的培養基及培養條件進行分離培養。
2.3 純培養 取平板上的單個菌落接種克氏雙糖斜麵37℃培養24h。做氧化酶試驗，葡萄糖氧化發酵試驗。根據初步生化選擇鑒定方向。
2.4 染色鏡檢 進行革蘭染色。
2.5 生化試驗 對疑似菌做係統生化試驗。
2.6 血清學試驗 對疑似菌做血清凝集試驗。
2.7 結果判定 綜合分析生長情況，生化特征，血清學試驗結果，作出鑒定。
3 結果
以陝西省臨床檢驗中心返回結果及得分為準。我室鑒定結果及全省的平均水平見表1、表2；50株質控菌包括20個菌屬見表3。表1 2001～2005年微生物室間質控菌株鑒定結果 表2 全省質控菌株鑒定平均PT（％）與我室PT（％）比較表3 50株質控菌株的分類從5年的微生物室間質控菌株鑒定結果看：我室細菌鑒定的正確率逐步提高，鑒定結果均高於全省的平均值。在2001年菌株鑒定中，有2株鑒定錯誤：如將鮑蔓不動杆菌鑒定為洛非不動杆菌；將腸出血性大腸埃希菌鑒定為普通大腸埃希菌。原因：對常見熟悉細菌的鑒定正確率高，對不常見的細菌因準備工作不充分，生化試驗的項目不全，導致非發酵菌的判斷錯誤，使鮑蔓不動杆菌錯判為洛非不動杆菌；腸出血性大腸埃希菌由於與O157診斷血清不發生凝集且山梨醇(+)、枸櫞酸鹽(-)、尿素(-)與正常不符，致鑒定錯誤。
4 討論［2～4］
2001～2005年鑒定質控菌株共50株，涉及近20個菌屬。旨在增加試驗的機會，鍛煉操作能力，積累工作經驗，提高細菌鑒定工作的準確性和工作效率，有助於及時發現細菌鑒定中的問題並及時加以改進。無論室間質控，室內質控，還是日常的檢驗工作，都應從多方麵做充分的準備，在多種樣品多種細菌同時存在的情況下，要求檢驗人員鑒定思路清晰，善於抓住被檢菌的生長特點、溶血能力、染色特性、動力等，選擇相應的檢驗程序，這樣可以避免試驗的盲目性，節約試驗時間。筆者有以下體會：
接到室間細菌質控樣本後，在規定時間內，與常規工作放在一起，由常規工作人員參加操作，使用與常規工作同樣的方法，同樣的試劑，同樣的步驟進行操作。既可以檢查自己的實驗室室內質控的質量，同時還了解自己試驗室與其他實驗室之間的差異，檢驗細菌鑒定結果的準確性。
在沒有全自動細菌鑒定儀等先進設備情況下，對於細菌鑒定要求檢驗工作者有較高的思想素質和業務水平，需要積累豐富的工作經驗。在球菌鑒定中，可通過血平板上菌落溶血特點，革蘭染色，顯微鏡觀察菌體形態作初步判定，再做係統生化進行鑒定；對革蘭陰性杆菌，為了迅速，準確鑒定，首先要做葡萄糖氧化發酵試驗和氧化酶試驗進行初步鑒定，以確定其為腸杆菌科細菌，非發酵菌及弧菌科細菌；然後再按各自的鑒定程序進行生化鑒定，見表4。表4 腸杆菌科細菌與其他革蘭陰性菌的鑒別在確定被檢菌為腸杆菌科細菌之後，可根據苯丙氨酸酶試驗和葡萄糖酸鹽試驗進行初步分屬，把常見的腸杆菌科細菌分為三大類，十二個屬，然後根據常見菌屬的生化特征作進一步鑒定，見表5。沙門菌、誌賀菌、大腸埃希菌等還應與相應的診斷血清作血清學凝集試驗，加以確定，在實際工作中隻有血清反應與生化試驗符合時，才具有診斷意義。表5 腸杆菌科細菌的初步分屬真空幹燥菌種初步分離培養後染色形態，有些生化反應可出現假陽性或假陰性結果；如：本室在鑒定腸出血性大腸埃希菌時，山梨醇(+)、枸櫞酸鹽(-)、尿素(-)與正常結果不符，因此,檢驗工作者工作時,應認真仔細、一絲不苟，以免發生判斷錯誤，有些生化反應經傳代後可恢複正常，在實際工作中應加以注意。
細菌的檢驗程序必須符合國家標準和專業標準，隻有標準化，才能規範化；隻有規範化，才能程序化。選擇合適的程序，才能使細菌的分離鑒定少走彎路，提高細菌鑒定的工作效率。5年的質控參與對我室的細菌鑒定工作有很大的提高，同時加強了對病原細菌引起的突發性公共衛生事件的應對能力，使我們的工作更好地為廣大人民群眾的健康服務，為疾病預防控製工作服務。以上是筆者在質控和實際工作中的一點體會，供同行們在實際工作中參考。
作者：席桂絨，張麗萍，高 濤，薛彩娥，李紅豔
作者單位：721001 陝西寶雞，寶雞市疾病預防控製中心
【參考文獻】
1 何曉青.衛生防疫細菌檢驗.北京:新華出版社,1989,184.
2 食品衛生國家標準.GB4789－1994.
3 周庭銀,趙虎.臨床微生物學診斷與圖解.上海:上海科技出版社,2001,1977.
4 食品衛生微生物學檢驗.GB/T4789-2003.
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