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細菌自動鑒定及藥敏係統的研究進展(2)



錄入時間:2011-2-23 9:13:34 來源:中華檢驗醫學網

(四)Vitek Ⅱ:
 
  在第一代Vitek的基礎上發展而成。有4個架子,每個架子能容納15片試驗卡。司同時容納60片試驗卡,每片試驗卡包含64個反應孔,采用快速熒光法測定細菌,2小時提供鑒定報告,鑒定敏感度高,分辨能力強。可在鑒定的同時進行藥敏試驗,結果可分級報告(先完成的藥敏結果先報告)。該儀器具有高級專家係統,可根據藥敏試驗的表則結果提示有何種耐藥機製的存在,對耐藥機製推斷準確性大於90%,MIC平均藥敏檢測所需時間9.74小時,比傳統方法縮短1天檢測時間,能對藥敏試驗的結果進行“解釋性”判讀。該專家係統還能自動複核檢驗結果,如發現鑒定與藥敏不符合的現象,即發出提示,要求進行複查。
 
(五)SENSITITRE MICROBIOLOGY SYSTEMS ARIS英國先德熒光快速微生物鑒定/藥敏係統工作原理
 
1.概述:
 
  SENSITITRE MICROBIOLOGY SYSTEMS ARIS由英國Accu Med公司於20世紀70年代開始研製生產。1996年12月美國惠好公司正式成為SENSITITRE在中國的總代理。分為全自動SENSITITRE Aris和半自動Auto-Reader兩種組合。可鑒定細菌180種。數據庫含500種細菌資料。可對200種抗生素進行分析,在全世界有800家用戶。1996年12月進入中國。國內5家用戶。
 
2.原理:
 
(1)鑒定原理:
 
  通過檢測熒光的增加間接地測定MIC值。SENSITITRE係統采用傳統生化反應,8進位數碼鑒定及熒光分析項結合。熒光分析是用熒光標記細菌表麵特異酶的底物,經細菌水解底物產生熒光來判斷結果。不同的細菌作用於不同的底物,激發出不同強度的熒光,即可鑒定不同的細菌。Sensititre的96孔鑒定板中共有32個生化反應,每4項生化反應為一組,第1項生化反應陽性值為“8”,第二項反應陽性值為“4”,第三項反應陽性值為“2”,第四項反應陽性值為“1”,各項反應陰性記為“0”。將每組4項反應的陰、陽性結果轉換成數值並相加,如2、3項生化反應為陽什,其組值為“6”。若組值超過9,則以字母代表,如第1、3項生化反應為陽性,組值應為“10”,此時就以“A”表示,若組值為11,則以“B”表示,以此類推。將各組反應的組值相加,32項生化反應可得到一組8位數的生物數碼。
 
(2)MIC測定原理:
 
  采用NCCLS推薦改良的微量肉湯稀釋2-8點,在每一反應孔內參與熒光底物,若細菌生長,表麵特異酶係統水解熒光底物,激發熒光,反之無熒光。以最低藥物濃度仍無熒光產生的濃度為最低抑菌濃度(MIC)。首創熒光快速分析技術,鑒定/藥敏分析時間明顯縮短。結果更準確。
 
  卓越的藥敏分析技術,可進行全值藥敏和閾值藥敏分析。全值8點藥敏分析法。
 
  采用最先進的熒光8點藥敏分析法,他是將每種抗生素稀釋成8種不同濃度進行藥敏分析,從而達到更準確的藥敏結果,實現真正的MIC,對藥劑量的控製更準確,大大提高臨床檢測及治療水平。
 
3.結構組成
 
(1)硬件
 
  模塊式組件:手動、自動、全自動可自由組合,易於升級。在ARIS的孵育箱有可盛放64板的轉盤。鑒定實驗中無需添加試劑和另測試驗。
 
A.Sensitouch(手動裝置)
B.ARIS(全自動裝置)
C.AutoReader(自動裝置)
D.AutoInoculatot(全自動加樣器)
 
(2)軟件
 
  采用功能強大的UNIX工作站係統軟件平台,可直接進入全院網絡同應用,軟件適用於各種組合的硬件係統。根據NCCLS標準設定強大的流行病學統計功能。可隨時通過軟件升級來增強係統功能。
 
(3)耗材
 
  96孔國際標準板,獨創3個樣本/每塊板、鑒定板、全值藥敏板、閾值藥敏板、鑒定/藥敏組合板、自由設定板。超過500種革蘭氏陰性致病菌及革蘭氏陰性菌。全世界最多最新的(300多種)抗生素藥敏分析,各種板有效期為18-24各月。全部消耗品常溫保存,避免預升溫過程。
 
4.性能特點
 
(1)首創熒光快速鑒定/藥敏分析
(2)95%的革蘭氏陰性菌鑒定在5小時內完成。
(3)獨創每塊板上分析3個樣本
(4)幹燥試劑技術使各種板有效期為18-24個月
(5)全部消耗品常溫保存,避免預升溫過程
(6)符合NCCLS標準的全值藥敏分析技術
(7)半自動組合可升級為全自動裝置。
 
(六) BD Phoenix System“鳳凰”全自動細菌/鑒定藥敏係統
 
1.概況1998年Becton Dickinson and Company公司Phonenix全自動細菌鑒定藥敏係統
 
2.原理
 
(1)鑒定原理:采用熒光增強原理與傳統酶、底物生化呈色反應結合的原理。
 
(2)藥敏試驗原理:通過傳統比濁法(Turbidity)和BD專利呈色(Chromogenic)反應雙重標準及熒光的增加間接地測定MIC值。
 
3.結構與組成
 
  PHOENIXTM100主機(PHOENIXTM50);BBL比濁儀;BDXPertTM微生物專家係統;BD EpiCenterTM微生物實驗室專業數據管琿係統。
 
4.性能特點
 
(1)同時檢測100份鑒定/藥敏標本,分別檢測100份鑒定標本及100份藥敏標本,總標本量為200份。
 
(2)140 GP database 80%ID 6 Hrs革蘭氏陽性標本鑒定時間僅需4小時.準確度91%-95%;
160 GN database 95%ID 3-5 Hrs革蘭氏陰性標本鑒定藥敏時間僅需3小時,準確度91%-95%;
78種藥物GN—90% in 5 Hrs;GP—80% in 6 Hrs,95% in 10 Hrs?真正的MIC實驗結果。藥敏試驗時間4-6小時,準確度95%。無需附加實驗.
 
(3)自動維護、自動質控。
 
(4)細菌鑒定種類革蘭氏陽性菌112種,革蘭氏陰性菌158種、厭氧菌、酵母菌、奈瑟氏菌及嗜血杆菌等。藥敏實驗所選抗生素98種:青黴素類、頭胞菌素類、氨基苷類、大環內脂類、喹諾酮類、四環素類、抗真菌藥、抗菌複合劑。
 
(5)鑒定板、藥敏板、或鑒定/藥敏複合板。鑒定/藥敏複合板51孔用於鑒定實驗,85孔用於藥敏實驗,可同時進行17種抗生素5種濃度或28種抗菌素3種濃度的MIC藥敏實驗。
 
(6)BD微生物專家數據處理係統對鑒定/藥敏結果進行能夠專業性分析判斷。
 
(七)MicroScan微生物自動鑒定及藥敏係統工作原理
 
1.概況
 
  MicroScan自動細菌鑒定係統由DadeMicroScan公司生產,其中包括全自動係列Walkaway 40和Walkaway 96以及半自動係列AutoScan-4。MicroScan係列是美國最普遍使用的(全自動、半自動、手工)鑒定係列之一,龐大的菌種資料庫可鑒定近500種細菌。
 
  1984年半自動AutoScan-4研製成功投入市場
 
  1989年全自動Walkaway研製成功,1991年正式上市。
 
2.原理
 
  MicroScan的WalkAway係列則采用8進製計算法分別將28個生化反應轉換成8位生物數碼。計算機係統自動將這些生物數碼與編碼數據庫進行對比,獲得相似係統鑒定值。快速熒光革蘭陽(陰)性板則根據熒光法的鑒定原理,熒光物質均勻地混在培養基中,將菌種接種到鑒定板後,通過檢測熒光底物的水解、底物被利用後的pH變化、特殊代謝產物的生成和某些代謝產物的生成率來進行菌種鑒定。
 
3.結構
 
  係統主要由WalkAway96儀器、測試板、快速接種係統和數據管理係統四部分組成。
 
1.WalkAwav96儀器部分測試板放入孵育箱後,在20min到3h內(山測試板的型號決定)係統要對測試板進行一次初讀,初讀的結果將作為以後讀板結果的對照。通過比色法測定的測試板經適當的孵育後,有些測試孔需添加試劑,此時WalkAway係統會自動添加,並延長孵育的時間,一般為5-30min。通過熒光法測定的測試板不需添加試劑,孵育完成後,係統立即讀板並將各孔的檢測數據自動儲存起來。
 
  WalkAway的熒光測定係統可直接對熒光測試板各孔中產生的熒光進行測定,並將熒光信號轉換成電信號,數據管理係統將這些電信號轉換成數碼,與原已儲存的對照值相比較,推斷出菌種的類型及藥敏結果。常規測試板則直接檢測電信號,從幹涉濾光片過濾的光通過光導纖維導入測試板上的96個測試孔,光感受二極管測定通過每個測試孔的光量,產生相應的電信號,從而推斷出菌種的類型及藥敏結果。
 
  在特殊情況下,藥敏測試板會出現讀板失敗的現象,此時可以用肉眼來校讀。直接觀察各孔中細菌的生長情況,若長菌,則記為陽性,若不長菌,則記為陰性,將結果輸入微機中,數據管理係統會得出藥敏結果。
 
2. 測試板 采用96孔塑料板作為測試板,孔內包被有用於菌種鑒定的生化反應的底物,或是用於測定MIC的不同稀釋濃度的各種抗生素,每孔可容納120μl的液體。每個板中均設有對照孔和生長孔。若讀板時檢測到生長孔中的細菌生長量不夠,就會給出“生長不充分”的提示,係統自動延長孵育時間。MicroScan測試板的類型各測試板上都附有條形碼,上機前經條形碼掃描器掃描後可被係統識別,係統會自動給測試板編號,以防標本混淆。
 
  MicroScan測試板的類型
 
革蘭陰性板 普通顯色革蘭陰性板 快速熒光革蘭陰性板
革蘭陽性板 普通顯色革蘭陽性板 快速熒光革蘭陽性板
快速熒光顯色板 厭氧菌板 酵母菌板 苛氧菌板
 
3.快速接種係統 係統配有真空接種器,可一次完成96孔菌液的接種。需指出的是,有許多細菌自動鑒定係統都配有自動接種器,大致可分為兩類:真空接種器和活塞接種器,以真空接種器應用較多。並且接種器上一般都配有標準麥氏濃度比濁儀,操作時隻需將稀釋好的菌液放入比濁儀中確定濃度即可。
 
4.數據管理係統負責數據的轉換及分析處理,並具有強大的統計功能,可進行菌種發生率、菌種分離率、抗生素耐藥率等流行病學統計。
 
四、注意事項
 
1.待檢細菌在用該係統測試前必須作塗片和革蘭染色,根據染色反應選擇所需試卡。
2.菌懸液配製後應在20min之內接種完畢並放入孵箱讀數器。
3.測試卡號必須書寫清楚。
4.被測試細菌要求培養時間在18—24h之間,新培養物最長不應超過48h,厭氧菌培養物不應超過72h。
5.加樣器和鹽水瓶應保持清潔、無菌。
6.認真標記外加試驗。
7.卡片要輕拿輕放,防止氣泡產生。
8.待檢菌同時作鑒定和藥敏試驗時,二卡片應寫同一測試卡號並放置同一卡片架上。
9.嚴格按手冊規定進行開機和關機,防止因程序錯誤造成信息丟失。
 
五、細菌快速檢測儀的儀器維修
 
1.定期清潔真空倉、封口器和讀數器反光鏡,避免由於灰塵而影響判斷的正確性。
2.定期(3個月)用ATCC標準菌株測試各種試卡一次,並作好質控記錄。
3.建立故障和維修記錄,詳細記錄每次故障的時間、內容、性質、原因和解決辦法。
4.定期由工程師作全麵保養,並排除故障隱患。
 
六、細菌自動鑒定及藥敏係統的進展趨勢
 
  微生物鑒定的自動化可以縮短微生物的鑒定時間,並可促進實驗室內和實驗室間的標準化,但是,它的試劑消犛費用、一次性設備投入都很高,在某些情況下其結果還需要候補方法確認。今後仍將致力於發展低費用,減少或取消候補方法確認,快速報告能在更短的時間內產生,提高智能化水平。
作者:北京中醫藥大學東方醫院檢驗科 陶慶春 安鵬 陳曉丹
 
參考資料
[1]曾照芳 翟建才主編.臨床檢驗儀器學(高等醫學院校教材).人民衛生出版社,2001,10;第1版
[2]張卓然主編.臨床微生物學和微生物學檢驗(全國高等醫學院校教材).人民衛生出版社,2003第3版
[3]張秀珍主編,當代細菌檢驗與臨床.人民衛生出版社,1999
[4]朱根娣主編.臨床常用檢驗儀器原理、構造、維護,上海科學技術文獻出版社,2002,8;
[5]李祖江主編.醫用檢驗儀器原理使用與維修.人民衛生出版社,1997,3;
[6]從玉隆主編.當代檢驗分析技術與臨床.中國科學技術出版社,2002,4;
[7]彭黎明主編.檢驗醫學自動化及臨床應用.人民衛生出版社,2003,1
[8]陶義訓主編.現代檢驗儀器導論.上海科學技術出版社,2002,8;
[9]bioLEADER微生物檢驗通訊2004年夏季刊
[10]學術會議資料匯編
[11]儀器廠商產品宣傳資料等
 
摘自《臨床檢驗及實驗室設備》2005年6月第七卷第2期

 

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