野菊花兩種提取方式對5種常見細菌的抑菌效果的比較

【摘要】  　　目的：觀察野菊花兩種提取方式對5種常見細菌的殺菌效果的分析。方法：分別用50%的乙醇和水煮提取野菊花的有效成份，用瓊脂稀釋法製備含野菊花不同藥物濃度的MH平板，在平板上點種不同的標準菌株，培養24h觀察平板上的細菌生長情況。結果水煮提取野菊花對大腸埃希菌、銅綠假單胞菌、糞腸球菌的最小抑菌濃度均為25%，對金黃色葡萄球菌、白色念珠菌的最小抑菌濃度均為50%;50%的乙醇提取野菊花對大腸埃希菌、白色念珠菌的最小抑菌濃度均為50%，對銅綠假單胞菌的最小抑菌濃度均為25%，對糞腸球菌、金黃色葡萄球菌的最小抑菌濃度最低，均為3.12%。結論: 兩種提取方法對革蘭陽性球菌的抑菌效果有明顯不同，相反，對革蘭陰性杆菌及白色念珠菌的抑菌效果無明顯差別。

【關鍵詞】  野菊花　最小抑菌濃度　瓊脂稀釋法

　　長期以來，大量的醫學工作者研究細菌對多種抗生素的敏感性，對中藥的抗菌活性及抗菌的特點較研究抗生素少得多。近年來由於抗生素的廣泛應用，細菌對抗生素的耐藥性不斷增強，人們開始關注中藥的抗菌作用，隨著研究的不斷深入，人們發現丁香、野菊花、五倍子、黃蓮等中藥有明顯的抑菌效果［1～3］。野菊花是其中的一類清熱解毒中藥，具有良好的抗菌消炎作用。本研究采用兩種不同方法提取的野菊花的有效成份對4種細菌和一種真菌的抑菌作用進行探討，旨在為中藥在臨床的應用提供依據。

　　1  標準菌株

    大腸埃希菌（ATCC25922）、銅綠假單胞菌（ATCC27853）、糞腸球菌（ATCC29212）、金黃色葡萄球菌（25923）、白色念珠菌（ATCC64550），以上菌株均購自衛生部臨床檢驗中心。

　　2  實驗方法

　　2.1  藥液的製備

　　2.1.1  水煮法 

　　稱取100g野菊花中草藥，加10倍量蒸餾水小火煮沸2次，每次1h，合並2次水煎液，濃縮至100ml，最終得濃縮液的濃度為100g/100ml，調整pH值至7.0～7.2，冰箱保存備用。

　　2.1.2  醇提法 

　　稱取一定量野菊花中草藥，適當粉碎，加5倍量對50%乙醇浸泡24h，60℃水浴箱熱浸3h，過濾後殘渣再加5倍量對50%乙醇熱浸3h，合並醇浸液，回收乙醇，最終得濃縮液的濃度為100g/100ml，調整pH值至7.0～7.2，冰箱保存備用。

　　2.2  培養基製備

　　2.2.1  MH培養基製備 

　　取一定量MH培養基幹粉，加入適量的蒸餾水，矯正pH至7.4，經高壓蒸汽滅菌(121℃)15min後備用。

　　2.2.2  含藥平板的製備 

　　待MH培養基冷卻至50℃左右，分別取一定量的乙醇和水煮提取野菊花藥液與MH培養基混合，製備厚度為4mm的含藥平板，每塊含藥平板含有野菊花藥液的濃度分別為50%、25%、12.5%、6.25%、3.12%、1.56%、0.78%,  50%所含生藥的量為50mg/100ml,其餘類推。

　　2.3  菌液的製備

    大腸埃希菌（ATCC25922）、銅綠假單胞菌（ATCC27853）、糞腸球菌（ATCC29212）、金黃色葡萄球菌（ATCC25923）血平板培養24h，白色念珠菌（ATCC64550）TTC沙保弱氯黴素瓊脂平板培養24h，分別從血平板和TTC沙保弱氯黴素瓊脂平板上挑取菌落配製成濃度為0.5麥氏單位的菌液備用。

2.4  菌液的點種

    將5種配置好的菌液分別點種於含有不同野菊花藥液濃度MH平板上，點種MH平板分2組：第1組為含有水煮提取的野菊花藥液MH平板，第2組為含有乙醇野菊花藥液MH平板。點種後放溫箱培養24h後觀察。

　　3  結果

    從表1和表2的對比可以看出，水煮提取野菊花對大腸埃希菌的最小抑菌濃度為25%，乙醇提取野菊花對大腸埃希菌的最小抑菌濃度為50%； 水煮提取野菊花對銅綠假單胞菌的最小抑菌濃度為25%，乙醇提取野菊花對大腸埃希菌的最小抑菌濃度也為25%；水煮提取野菊花對糞腸球菌的最小抑菌濃度均為25%，乙醇提取野菊花對糞腸球菌的最小抑菌濃度均為3.12%；水煮提取野菊花對金黃色葡萄球菌的最小抑菌濃度為50%，乙醇提取野菊花對金黃色葡萄球菌的最小抑菌濃度為3.12%；水煮提取野菊花對白色念珠菌的最小抑菌濃度為50%，乙醇提取野菊花對白色念珠菌的最小抑菌濃度大於50%。兩種提取方法對革蘭陽性球菌的抑菌效果差別較大，相反對革蘭陰性杆菌及白色念珠菌的抑菌效果差別較小。

表1  水煮提取的野菊花藥液的抑菌狀況（略）表2  乙醇提取的野菊花藥液的抑菌狀況（略）

    4  討論

    大腸埃希菌、銅綠假單胞菌、糞腸球菌、金黃色葡萄球菌、白色念珠菌是醫院內感染的常見的致病菌，臨床感染若不能夠及時醫治可致嚴重後果。近年來由於抗生素的廣泛應用，導致大量耐藥菌株的出現使抗生素的抗菌效果越來越差，現在產超廣譜β內酰胺酶的大腸埃希菌、耐萬古黴素的腸球菌、耐甲氧西林的金黃色葡萄球菌、產金屬酶的銅綠假單胞菌已成為臨床治療的棘手問題，如何解決這一問題是擺在我們麵前的一道難題。

    目前人們發現多種中藥具有一定的抗菌活性，研究表明野菊花對多種炎症、感染有較好的效果［4,5］，並且中藥還具有西藥所不具有的緩和、持久、副作用小、調理人體的免疫功能、不易產生耐藥的優點，因此受到醫學接界廣泛關注。本研究通過對野菊花抗菌活性的研究表明其對多種細菌均有一定的抗菌作用，近一步研究發現不同的提取方法對野菊花抗菌活性有明顯的不同。從表1和表2的對比可以看出乙醇提取野菊花提取液對革蘭陽性球菌的抑菌效果明顯好於水煮提取的野菊花提取液，所以臨床應根據患者所感染的細菌的種類選擇合適的提取方法。

總之，隨著人們對中藥的認識不斷加深，提取中藥有效成分的工藝不斷完善，未來中藥在臨床抗菌的應用方麵一定會有光明的前景。

 

 作者：方靜 王德 周學琴 《數理醫藥學雜誌》

【參考文獻】

  　　1 俞利平,蔡玲斐.金銀花、苦丁茶、野菊花、決明子的抗菌性能測定.杭州醫學高等專科學校學報,，2003，24（2）：77～78.

　　2 李仲興，王秀華，張立誌，等.應用MH瓊脂進行五倍子等5種中藥對28株腸球菌體外活性的觀察. 中草藥，2001，32（12）：1101～1102.

　　3 陳星燦，劉安定，宮錫坤.中藥抗菌作用研究 . 中醫藥學報，1998，1：36～37.

　　4 華海清.野菊花臨床應用研究概況. 湖南中醫藥導報，1994，1（10）：36～38.

5 李道中，程村貴.野菊花提取液的藥理及臨床應用. 藥學進展， 1999，23（6）：344～345.