【摘要】 目的研究金銀花CO2超臨界萃取(SFE)物的體外抑菌作用。方法采用瓊脂擴散法和試管稀釋法研究金銀花的5種提取工藝,即SFE萃取、SFE-C萃取(C表示帶夾帶劑)、乙醇提取、超聲波提取、共水蒸餾(SD)法提取,所得提取原液藥物對6種細菌,即金黃色葡萄球菌、大腸杆菌、枯草芽孢杆菌、白色葡萄球菌、綠膿杆菌、鼠傷寒沙門氏菌的抑菌作用。結果5種提取原液藥物對6種細菌均有一定抑製作用,而且SFE萃取物對綠膿杆菌的MIC 為1∶16;SFE-C萃取物對金黃色葡萄球菌和綠膿杆菌的 MIC 均為1∶16。結論與傳統的提取方法相比,采用SFE-C和SFE工藝得到的萃取物含非綠原酸類熱敏抗菌物質,提高了金銀花的抗菌效果。
【關鍵詞】 金銀花 二氧化碳超臨界萃取 夾帶劑 體外抑菌
Abstract:ObjectiveTo research the growth inhibition of CO2-SFE extracts from Lonicerae on bacteria in vitro. MethodsThe agar diffusion and tube dilution methods were used to study the growth on bacteria inhibition of the Lonicerae extracts with five different kinds of extraction approaches, which were SFE extraction, SFE-C extraction, alcohol extraction, ultrasonic extraction and SD extraction, by applying them to the following bacteria: Staphylococcus aureus, Escherichia coli, Bacillus subtilis, Staphylococcus albus, Pseudomonas aeruginosa, Salmonella typhimurium. ResultsAll Lonicerae extracts with five kinds of extractions were effective to the bacteria;the MIC against Pseudomonas aeruginosa of SFE extracts was 1∶16;The MIC against Staphylococcus aurous and Pseudomonas aeruginosa of SFE-C extracts was 1∶16. ConclusionCompared with the conventional extractions methods, the extracts with SFE-C extraction and SFE extraction include the heat-sensitive substances which would enhance the inhibiting bacteria ability.
Key words:Lonicerae; CO2 Supercritical extraction; Cosolvent; In vitro inhibition
金銀花為忍冬科Caprifoliaceae忍冬屬Lonicera植物的幹燥花蕾或帶初開的花,為中醫常用藥,具有清熱解毒、涼風散熱之功效[1]。現代藥理研究表明金銀花具有較為廣泛的藥理作用,如抗菌、抗病毒、抗炎解熱、保肝、抗生育、抗氧化、止血等,這些研究為金銀花的臨床用藥提供了科學依據,但所確定的有效部位均是水提取物或醇提取物[2,3],有效成分不夠明確和具體,因此難以建立有效的質量控製方法。
針對以上不足,我們采用不同的提取工藝,對金銀花加入夾帶劑CO2超臨界(SFE-C)萃取[4]、未加夾帶劑CO2超臨界(SFE)萃取[5]、乙醇醇提取[6]、超聲波提取、共水蒸餾法(SD)提取[7]5種提取原液藥物中的揮發油類、黃酮類及綠原酸類成分分別進行了富集處理,采用瓊脂擴散法和試管稀釋法對各個提取物進行了體外抑菌實驗研究。
1 儀器與材料
1.1 藥品JYH-1(采用SFE-C工藝提取物,其中JYH-X表示第x種金銀花提取物,後麵括號給出提取工藝說明):山東產金銀花藥材,烘幹,研碎,再放入萃取釜,加入夾帶劑,在
1.2 培養基
1.3 菌株所用菌株包括由浙江工業大學生物製藥研究所提供的金黃色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌、大腸杆菌以及由中國科學院微生物研究所購得的綠膿杆菌、白色葡萄球菌、鼠傷寒沙門氏菌共6種。
2 方法
2.1 測藥物的抑菌圈直徑定性分析藥物的抗菌作用采用瓊脂擴散法[8]。每平皿加0.1 ml 菌液(菌液濃度為 1.0×105 cfu/ml),塗布整個培養基表麵,
2.2 定量測量藥物對細菌的最低抑菌濃度 (MIC) 及最小殺菌濃度 (MBC)采用試管稀釋法,(每種藥物每種菌)用無菌小試管11隻排於試管架,第1隻不加肉湯培養基,第2~11管各加1 ml;於第1隻試管中加入配置好的藥液2 ml,然後取 1 ml 加入第2管,混勻後取1 ml 加入第3管,依次倍比稀釋,自第10管吸出1 ml 棄去,第11管係對照管。將各管中加入已校正濃度的菌液(1.0×105 cfu/ml)0.1ml,混勻後放置
3 結果
3.1 藥物的抗菌作用JYH-1,JYH-2,JYH-3,JYH-4和JYH-5這5 種提取原液藥物的生藥含量分別為5.4,92.6,1,2.6,
3.2 藥物對細菌的最低抑菌濃度 (MIC) 及最小殺菌濃度 (MBC)按照“
表3顯示,醇提物(綠原酸含量79.4%)殺菌效果最顯著,對大腸杆菌、金黃色葡萄球菌、綠膿杆菌的MBC 均為1∶8,SFE-C 萃取物對綠膿杆菌抑菌作用較強,其MBC 為1∶8;而超聲提取黃酮和SD 揮發油殺菌作用弱,說明SFE-C 萃取物(其中綠原酸占26 %,是醇提物的1/3)殺菌效果強於超聲提取黃酮和SD 揮發油,接近於醇提綠原酸殺菌效果,綜合考慮綠原酸含量,MBC,MIC,表明SFE-C 萃取物中含有醇提物中所沒有的非綠原酸類抑菌物質;文獻報道[9]金銀花中有熱敏性抑菌成分。SFE-CO2可較好地避免熱敏成分破壞 (本文采用
4 結論
5種提取原液藥物對6 種細菌均有一定抑製作用, SFE-C萃取物對金黃色葡萄球菌和綠膿杆菌的 MIC 均為1∶16;SFE萃取物對綠膿杆菌的MIC 為1∶16。綜合考慮綠原酸含量,MBC,MIC,可知SFE萃取物和SFE-C 萃取物中含有醇提物中所沒有的非綠原酸類抑菌物質。金銀花中含非綠原酸類熱敏抑菌物質,使金銀花的抗菌效果提高。這方麵工作值得進一步研究。
作者:蘇香萍 龔大春 張亞雄 龔美珍《時珍國醫國藥》
【參考文獻】
[1] 國家藥典委員會. 中國藥典,Ⅱ部[S]. 北京:化學工業出版社,2000:177.
[2] 趙良忠,蔣賢育,段林東,等. 金銀花水溶性抗菌物質的提取及其抑菌效果研究[J]. 中國生物製品學雜誌,2006,19(2):201.
[3] 羅 娟,李友鳳,胡曉蓮,等. 綠原酸的提取及稀土配合物抗菌活性測定[J]. 林產化學與工業,2007,27(2):85.
[4]
[5] Benvenuti F, Gironi F, Lamberti L. Supercritical deterpenation of lemon essential oil, experimental data and simulation of the semicontinuous extraction process[J]. J Supercritical Fluids, 2001, 20(1):29.
[6] 張雁冰,寇 嫻,王桂紅. 密縣金銀花及琪莖葉中綠原酸含量的測定[J]. 河南醫科大學學報,1999,34(2):36.
[7] 童巧珍,周日寶. 金銀花揮發油提取工藝探討[J]. 湖南中醫學院學報,2002,22(4):24.
[8] 潘清平,
[9]