147株住院患者呼吸道念珠菌感染的鑒定及耐藥性分析

 摘要： 目的 對呼吸道分離的念珠菌進行鑒定並做耐藥性分析。方法 采用科瑪嘉顯色培養基對分離的147株念珠菌進行菌種鑒定，並用Rosco商品化紙片進行耐藥性分析。結果 呼吸道念珠菌感染中以白念珠菌為主(755%)，非白念珠菌感染呈上升趨勢。兩性黴素、製黴菌素耐藥率最低，分別為61%，34%，其次為伊曲康唑(170%)，氟康唑耐藥率最高(571%)，克柔念珠菌是耐藥性較強的念珠菌，依次是光滑念珠菌、熱帶念珠菌；非白念珠菌與白念珠菌相比耐藥率有顯著差異(P=0000)。有387%的念珠菌對2種或2種以上抗真菌藥物耐藥。結論 呼吸道念珠菌感染呈上升趨勢，應加強念珠菌的檢測和耐藥性分析。

　　關鍵詞： 念珠菌； 真菌鑒定； 耐藥性分析 

    近年來隨著廣譜抗生素的廣泛應用，腫瘤化療、器官移植的開展以及免疫力低下患者的增多，由深部真菌引起的機會性感染日益增加，尤其多見於呼吸道標本中。患者往往有嚴重的基礎疾病，並長期使用抗生素，由於條件致病性念珠菌感染病例不斷增多，又使得真菌治療後的耐藥問題日漸突出。我們對2003年6月～2004年11月呼吸道分離的147株念珠菌菌種及藥敏結果進行回顧分析，現報道如下。

    1 材料與方法

    1.1 試驗菌株收集2003年6月～2004年11月我院住院患者痰標本中分離的147株念珠菌。

    1.2 質控菌株白念珠菌ATCC64548。

    1.3 藥敏紙片及真菌藥敏瓊脂酮康唑、氟康唑、伊曲康唑、兩性黴素B、製黴菌素、咪康唑和特比奈芬等7種藥敏紙片及改良Shadomy瓊脂平板均購自丹麥Rosco公司。

    1.4 培養與鑒定菌落分離於沙保弱瓊脂培養基(Oxoid，英國)，用科瑪嘉顯色培養基(鄭州博賽科技有限公司)及VITEK2真菌鑒定板鑒定到種。

    1.5 藥敏試驗(1)接種液的配製 挑取單個菌落於無菌鹽水，調製成為15×108CFU/ml的菌懸液，再用生理鹽水1∶1稀釋。克柔念珠菌先配成15×108CFU/ml的菌懸液，再用生理鹽水1∶10稀釋。(2)按資料所提供的方法和標準進行操作 Shadomy瓊脂培養(9cm厚)先置35℃幹燥20～25min，吸取05ml接種液傾注於斜麵，均勻塗抹，吸走多餘的液體，35℃幹燥10min，貼藥敏紙片，培養18～24h後判讀結果。判讀標準參考Rosco公司提供的藥敏試驗標準。

    1.6 統計學方法用SPSS11.0軟件包分析結果，耐藥率的比較用χ2檢驗。

    2 結果

    2.1 147株念珠菌鑒定白念珠菌占755%(111/147)，光滑念珠菌占17%(25/147)，熱帶念珠菌占54%(8/147)，克柔念珠菌占20%(3/147)，白念珠菌的檢出率明顯高於光滑念珠菌(P=0000)。

    2.2 147株念珠菌對真菌藥物的耐藥率結果見表1。

    2.3 白念珠菌與非白念珠菌的耐藥性比較結果見表2。

近年來，我們發現真菌感染以呼吸道感染最嚴重， 表1 147株念珠菌對真菌藥物的耐藥率表2 白念珠菌與非白念珠菌的耐藥性比較可能是患者的呼吸道防禦屏障受損，呼吸功能不全，免疫功能低下，真菌在呼吸道粘膜易於定植所致，在真菌感染中白念珠菌是人類最常見的條件致病菌［1］(本研究白念珠菌占755%，與國外報道一致［2］)。近年來，人類念珠菌感染有由白念珠菌轉向其他非白念珠菌感染的趨勢［3］。本研究非白念珠菌感染占245%，這也與國內、外的報道一致［4］。以往熱帶念珠菌在真菌感染中居第2位，本研究中已排列第3位，說明各真菌構成比也在發生一定的改變，非白念珠菌的感染呈上升趨勢，有文獻報道，氟康唑對克柔念珠菌引起的感染無效，與我實驗相符(對克柔念珠菌的耐藥率達100%)，酮康唑對熱帶念珠菌療效不佳［5］。隨著氟康唑應用的日益廣泛，白念珠菌較其他念珠菌對氟康唑敏感而被殺死，導致念珠菌症向非白念珠菌症變遷，且那些感染菌對抗真菌藥物的耐藥率明顯高於白念珠菌，非白念珠菌與白念珠菌對抗真菌藥物的耐藥率相比有顯著差異(P=0000，兩性黴素因副作用大，臨床較少使用)。我們還發現，多重感染的患者長期接受抗真菌藥物治療，使其對常用抗真菌藥物敏感性降低，出現念珠菌的多重耐藥現象，導致少見的致病性真菌寄生和感染現象增加。本研究有387%的念珠菌對2種或2種以上抗真菌藥物耐藥，隻有32%的念珠菌對所有測試的抗真菌藥物均敏感。痰標本中147株念珠菌對7種常用抗真菌藥物的耐藥率顯示，兩性黴素B和製黴菌素的耐藥率最低(34%～61%)，伊曲康唑其次，氟康唑的耐藥率最高(571%)。氟康唑不良反應小，較安全，能廣泛滲透體液組織器官，對念珠菌屬、隱球菌屬感染療效較好，目前臨床廣泛使用，部分念珠菌已出現耐藥，我們共檢出84株(571%)耐氟康唑的念珠菌(克柔念珠菌被認為對氟康唑天然耐藥［6］，不在此範圍)，以光滑念珠菌和熱帶念珠菌的比例稍高；耐伊曲康唑念珠菌25株(17%)，以克柔念珠菌和光滑念珠菌比例高；耐酮康唑的念珠菌70株(476%)，以光滑念珠菌和熱帶念珠菌為主；耐咪康唑、特比奈芬的念珠菌為49株(333%)，均以克柔念珠菌和熱帶念珠菌比例高。綜上所述，克柔念珠菌對酮康唑、氟康唑、伊曲康唑、咪康唑和特比奈芬的耐藥株均占半數以上，故認為是耐藥性較強的念珠菌，依次為光滑念珠菌、熱帶念珠菌。白念珠菌盡管有1/2菌株對氟康唑耐藥，但對其他抗真菌藥物的敏感性仍然較好，因此，將臨床分離的念珠菌鑒定至種水平，對臨床抗真菌感染治療有著重要的指導意義。建議有嚴重免疫功能低下的患者，應避免長期使用唑類藥物。此外，微生物科應與臨床密切配合，加強真菌的檢測和耐藥性監測工作，合理選擇用藥，使患者得到及時、準確的醫治，以免貽誤治療影響預後。

 

作者：周小明 嚴子禾 胡錫池《中國抗生素雜誌》

    參考文獻

    ［1］ 李影林. 臨床微生物學及檢驗［M］. 第2版. 北京：人民衛生出版社，1995：619

    ［2］ BeckSague C M, Jarvis T R. Secular trends in the epidemiology of nosocomial fungal infections in the United States ［J］. J Infect Dis,1993,167:1247

    ［3］ 王文莉，王端禮. 念珠菌對咪唑類藥物耐藥現象的研究現狀［Ｊ］. 國外醫學皮膚性病學分冊，1996，22：

    ［4］ 陶風蓉，宣天芝，張秀珍. 用Etest方法監測酵母樣真菌對氟康唑的耐藥性［J］. 中華醫學雜誌，2002，12(18)：632

    ［5］ 王蘇建，王友良. 真菌血症18例微生物學及臨床分析［J］. 中華醫學檢驗雜誌，1999，22：97

［6］ Rocco T R, Reinert S E, Simms H. Effects of fluconazole administration in critically ill patients ［J］. Arch Surg,2000,135:160