摘要：目的比較蒼耳和灰白毛莓的體外抑菌作用以及二者配伍製劑的抑菌效果。方法采用濾紙片法測定抑菌圈直徑，二倍稀釋法測定最低抑菌濃度。結果灰白毛莓的抑菌範圍較蒼耳廣，且灰白毛莓全株對金黃色葡萄球菌、雞沙門氏菌的抑製作用較蒼耳強，蒼耳的莖葉對銅綠假單胞菌的抑製作用較灰白毛莓強。結論灰白毛莓的抑菌範圍比蒼耳的抑菌範圍更廣，二者的配伍製劑有協同作用。
關鍵詞：蒼耳； 灰白毛莓； 體外抑菌作用
Bacteriostastic Comparison of X .sibiricum Patrin and R. tephrodes Hance in Vitro
Abstract:ObjectiveThe experiment tests the bacteriostastic activity of different organs of Xanthium sibiricum patrin, Rubus tephrodes Hance and their organs different compatibility of medicines.MethodsOne is to determine the inhibition zone diameters with filter paper. The other is minimum inhibitory concentration by the double dilution method.ResultsR.tephrodes Hance has a wider antimicrobial spectrum, while a stronger effect against Staphylococcus aureus and Salmonella gallinarum. X.sibiricum Patrin's stem and leaf could produce bacteriostasis stronger than R.tephrodes Hance against Pseudomonas aeruginosa.ConclusionR.tephrodes Hance has a wider antimicrobial spectrum than X. sibiricum Patrin. The compatibility of both medicines have a cooperative interaction.
Key words:Xanthium sibiricum Patrin; Rubus tephrodes Hance; Bacteriostasis in vitro
菊科蒼耳屬植物，在我國有3種1變種，其中分布最廣的是蒼耳(Xanthium sibiricum Patrin)，我國大部分省區都有，生長於山野、路邊、田邊、農舍附近，俗稱野棉花、常思菜、癡頭婆、粘粘子等。蒼耳葉苦辛，性微寒，具祛風清熱、解毒鎮痛等多種功效［1］，臨床上用來治療慢性鼻炎、麻風病、腸傷寒、皮膚癌、功能性子宮出血等［2］。蒼耳果實為常用的中藥材――蒼耳子，具有消炎鎮痛之功效，用於治療風寒頭痛、風疹瘙癢、濕痹拘攣等［3］；蒼耳根主要治療疔瘡、癰疽、痢疾、丹毒等［2］。薔薇科懸鉤子屬的灰白毛莓(Rubus tephrodes Hance)，俗稱烏泡。分布於兩湖、兩廣、安徽、福建等省，生長在海拔330~2 280 m的路旁、溪邊、灌木叢和山間坡地等光線較強的地方［4］。其葉可止血解毒，主治外傷出血、癰癤瘡瘍；其根能祛風除濕，活血調經，主治風濕疼痛、慢性肝炎、月經不調、痢疾、跌打損傷；其種子入藥為強壯劑。在湘西一帶的少數民族地區，常常取灰白毛莓的葉汁治療痢疾。蒼耳和灰白毛莓都是生命力較強的野生植物，具有很多功效。現在對蒼耳的研究已經比較廣泛和深入，但對蒼耳抑菌作用的報道較少；而對灰白毛莓的研究還非常少，對它的抑菌作用的研究尚未見報道。我們用濾紙片法和二倍稀釋法對這兩種植株不同器官提取液、以及它們不同器官提取液的配伍製劑的體外抑菌作用進行了實驗，旨在比較兩種植物的抑菌效果和協同用藥的功效，為藥用植物的開發利用做一些基礎工作。
1 實驗材料
1.1 供試菌種銅綠假單胞菌（Pseudomonas aeruginosa）；普通變形杆菌（Proteus vulgaris CCTCC AB91103）；大腸埃希氏菌（Escherichia coli CVCC249）；產氣腸杆菌（Enterobacter aerogenes）；雞沙門氏菌（Salmonella gallinarum）；金黃色葡萄球菌（Staphylococcus aureus CCTCC AB91053）；以上菌種均由懷化學院微生物學實驗室提供。
1.2 實驗植株實驗所用植株於2004－06、蒼耳子於2004－11采自湖南省懷化市。
1.3 培養基實驗所用培養基為LB（Luria-Bertani）液體培養基和LB固體培養基。
2 實驗方法
2.1 中草藥的煎製將灰白毛莓的根、莖、葉和蒼耳的根、莖葉、蒼耳子分別洗淨切碎，於60℃下幹燥16~18 h後，用蒸餾水煎煮2次，60 min/次。合並濾液，於8 000 r/min離心15 min，取濾液濃縮至每毫升含生藥1 g（1 g/ml）。滅菌後冰箱保存備用。
2.2 菌液的製備分別取6種供試菌種的新鮮營養瓊脂斜麵培養物適量，接種於LB液體培養基內於37℃、160 r/min下培養16~18 h。然後稀釋至10-4備用（約為106 cfu/ml）。
2.3 體外抑菌實驗
2.3.1 濾紙片法測定抑菌效果取直徑為6mm的圓形濾紙片570片於121℃下濕熱滅菌備用。90片為1組，分別放入濃度為1 g/ml的兩種植株的不同器官提取液中浸泡3 min。將10-4供試菌液各取0.1 ml塗布在固體培養基上，製成含菌平板，然後取含藥液浸出汁的濾紙片貼在平板上，每皿貼5片，每菌做3份平行。另外，每個菌種用未浸泡的濾紙片做1份空白對照。10 min後倒置於37℃下培養24 h，測定濾紙片的抑菌圈大小（含濾紙片大小），比較抑菌效果。
2.3.2 二倍稀釋法測最低抑菌濃度（MIC）將滅菌試管分成6大組，每組36支。36支試管再分成6小組，每組6支。第1支試管中加入1 ml 2倍濃度的LB液體培養基，第2~5支試管中各加入1ml LB液體培養基，向第1支試管中加入1 ml藥液後按二倍稀釋法，使各管藥液濃度分別為0.5，0.25，0.125，0.062 5，0.031 25 g/ml，然後向每組試管中加入0.1 ml不同菌種的10-4菌液，第6支試管中加2 ml LB液體培養基，不加藥液作為對照。將培養物置於37℃培養16~18 h。從以上培養物中分別取0.1 ml塗布於固體LB培養基平板上，每份平行做3次。於37℃培養16~18 h後觀察。同樣采用二倍稀釋法測定蒼耳和灰白毛莓提取液的兩種不同配伍製劑的最低抑菌濃度。
3 實驗結果
3.1 濾紙片法測定抑菌圈大小
3.1.1 蒼耳提取液的抑菌效果蒼耳子提取液對銅綠假單胞菌、普通變形杆菌、大腸埃希氏菌、產氣腸杆菌、雞沙門氏菌、金黃色葡萄球菌的抑菌圈大小分別為６.1，６.0，6.1，6.0，6.5，6.4 mm；蒼耳根對銅綠假單胞菌、普通變形杆菌、大腸埃希氏菌、產氣腸杆菌、雞沙門氏菌、金黃色葡萄球菌的抑菌圈大小分別為６.3，6.1，6.0，6.1，6.0，6.1 mm；蒼耳莖葉對上述6種供試菌種的抑菌圈大小分別為9.0，6.0，6.4，6.3，6.3，６.4 mm。見表1。
表1 蒼耳提取液對供試菌種的抑製效果mm供試菌種（略）
3.1.2 灰白毛莓提取液的抑菌效果白毛莓根對銅綠假單胞菌、普通變形杆菌、大腸埃希氏菌、產氣腸杆菌、雞沙門氏菌、金黃色葡萄球菌的抑菌圈大小分別為6.6，6.2，6.1，6.0，8.3，8.5 mm；灰白毛莓莖對上述六種供試菌種的抑菌圈大小分別為6.3，6.7，6.3，6.5，6.2，8.9 mm；灰白毛莓葉對上述6種供試菌種的抑菌圈大小分別為7.0，6.0，6.4，6.9，6.9，9.8 mm。見表2。
3.2 最低抑菌濃度（MIC）的測定
3.2.1 蒼耳提取液的MIC蒼耳莖葉對銅綠假單胞菌的抑製作用最強，其MIC為0.062 5 g/ml，對大腸埃希氏菌、金黃色葡萄球菌、產氣腸杆菌和雞沙門氏菌的MIC均為0.5 g/ml，對普通變形杆菌無抑製作用；蒼耳根對銅綠假單胞菌的MIC為0.5 g/ml，對其它五種供試菌種均無抑製作用；蒼耳子對金黃色葡萄球菌、雞沙門氏菌的MIC為0.5 g/ml，對其它4種供試菌種均無抑製作用。見表3。
表3 蒼耳提取液對供試菌種的MICg・ml（略）
從表3可知，蒼耳莖葉對除普通變形杆菌以外的5種供試菌種均有抑製作用，抑菌範圍最廣；蒼耳子對金黃色葡萄球菌和雞沙門氏菌有抑製作用；蒼耳根隻對銅綠假單胞菌有抑製作用，抑菌範圍最窄。蒼耳莖葉對銅綠假單胞菌的抑製作用最強。
3.2.2 灰白毛莓提取液的MIC灰白毛莓葉對金黃色葡萄球菌的抑製作用最強，其MIC為0.031 25 g/ml，對銅綠假單胞菌、產氣腸杆菌和雞沙門氏菌的MIC為0.25 g/ml，對大腸埃希氏菌的MIC為0.5 g/ml，對普通變形杆菌無抑製作用；灰白毛莓莖對金黃色葡萄球菌的MIC為0.125 g/ml，對大腸埃希氏菌、銅綠假單胞菌、普通變形杆菌、產氣腸杆菌和雞沙門氏菌的MIC均為0.5 g/ml；灰白毛莓根對金黃色葡萄球菌、雞沙門氏菌的MIC為0.125 g/ml，對銅綠假單胞菌的MIC為0.25 g/ml，對普通變形杆菌的MIC為0.5 g/ml，對大腸埃希氏菌、產氣腸杆菌均無抑製作用。見表4。
表4 灰白毛莓提取液對供試菌種的MICg・ml（略）
從表4可知，灰白毛莓莖對6種供試菌種均有抑製作用，抑菌範圍最廣；灰白毛莓根隻對4種供試菌種有抑製作用，抑菌範圍最窄；灰白毛莓葉對五種供菌種有抑製作用。灰白毛莓的各器官都是對金黃色葡萄球菌的抑製作用最強，另外，灰白毛莓根對雞沙門氏菌的抑製作用是最強的。
3.2.3 蒼耳和灰白毛莓提取液配伍製劑的MIC蒼耳根+灰白毛莓莖葉的配伍製劑對6種供試菌種的MIC均為0.25 g/ml；蒼耳莖葉+灰白毛莓根的配伍製劑對銅綠假單胞菌的MIC為0.125 g/ml，對其餘5種供方式菌種的MIC均為0.25 g/ml，見表5。
表5 蒼耳和灰白毛莓不同配伍製劑對供試菌種的MIC （略）
從表5可知，蒼耳和灰白毛莓聯合使用時對6種供試菌種均有抑製作用，而且對大腸埃希氏菌、普通變形杆菌和產氣腸杆菌的抑菌作用增強，比單獨使用灰白毛莓和蒼耳的任何一種器官的MIC都要小。
4 討論
4.1 灰白毛莓根、莖、葉都是對金黃色葡萄球菌的抑製效果最強，抑菌圈直徑分別為8.5，8.9，9.8 mm；蒼耳莖葉對銅綠假單胞菌的抑製效果最強，抑菌圈直徑為9.0 mm，蒼耳提取液對其餘5種供試菌種的抑製圈直徑均比灰白毛莓小。
4.2 灰白毛莓的抑菌範圍比蒼耳的抑菌範圍廣。灰白毛莓全株對金黃色葡萄球菌、雞沙門氏菌的抑製作用較蒼耳強，蒼耳的莖葉對銅綠假單胞菌的抑製作用較灰白毛莓強。
4.3 實驗所用的抑菌物質是煎煮的中草藥製劑，顏色較深，若采用試管法會因為顏色深而導致觀察不準確; 若采用打洞法則會因為中草藥擴散慢、抑菌弱, 也無法得到準確的抑菌濃度; 我們采用了濾紙片法、二倍稀釋法，它具有顯示穩定的優點, 很適合比較中草藥的抑菌效果和測定中草藥的抑菌濃度。
4.4 灰白毛莓和蒼耳的配伍製劑有協同作用。對大腸埃希氏菌、普通變形杆菌和產氣腸杆菌，二者的不同器官交叉聯合用藥抑菌效果較好。但對銅綠假單胞菌，單獨使用蒼耳的莖葉抑菌效果好；對金黃色葡萄球菌，單獨使用灰白毛莓的根、莖、葉抑菌效果均好；對雞沙門氏菌，單獨使用灰白毛莓的根抑菌效果較好。
4.5 實驗結果表明，灰白毛莓的抑菌範圍比蒼耳的抑菌範圍更廣，灰白毛莓全株對金黃色葡萄球菌、雞沙門氏菌的抑製作用比蒼耳更強。但是，動物體內的免疫係統非常複雜，一種藥物在機體內的殺菌效果與體外實驗會有差異，灰白毛莓在機體內的殺菌效果是否比蒼耳強，還有待進一步驗證。另據報道，薔薇科懸鉤子屬是一類重要的小漿果果樹資源，國外早就培育出許多栽培品種，並已開始大麵積栽培［5］。灰白毛莓鮮果中色素（總花色苷）含量比同屬色素植物中的色素含量最高者還要高，而且該色素耐熱性強，是一種高含量的色素資源植物，具有很好的開發應用前景［6］。因此，對灰白毛莓的研究剛剛起步，具有很好的研究前景。
作者：付明 劉勝貴 伍賢進 《時珍國醫國藥》
參考文獻：
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［3］ 國家藥典委員會 .中國藥典，Ⅰ部［S］.北京：化學工業出版社，2000：128 .
［4］ 顧 姻, 趙昌民, 王傳永，等.貴州省懸鉤子屬種質資源考察［J］.植物資源與環境，1994, 2(2): 1.
［5］ Anick J, Moore J N. (translated by Deng M Q, Jing S X, Hong J Y). Advances in Fruit Breeding［M］.Beijing: Agriculture Press, 1989(in Chinese).
［6］ 陳 斌, 於華忠, 穀伏安，等.灰白毛莓紅色素的開發研究［J］.中國野生植物資源，1997, 16(4): 1.
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