注射用法莫替丁的無菌檢查法

【摘要】  　　目的：驗證注射用法莫替丁的無菌檢查法。方法：本試驗采用中國藥典2005年版二部（附錄取ⅪH）所載的“無菌檢查法”項下進行試驗。結果：樣品管無菌生長，六株陽性菌生長良好。結論：經方法學驗證，該方法準確可靠，可作為注射用法莫替丁的無菌檢查法。

【關鍵詞】  注射用法莫替丁無菌檢查法（薄膜過濾法） 方法驗證

　　Verification for Sterility Test of Famotidine for Injection

　　LiYan  JiangLi  PeiMingRi

　　（Jinlin prouincia Institute for food and Drug Control 132011）

　　【Abstract】Objective:To verisy the sterility test of Famotidine for Injection.Method:Verification test in Pharmacopeia of P.R.China(Chp)2005 was used.Resuly:All of six strains positove control tubes reveal growth of micro-organism and the substance control gives no evidence of growth.Conclusion:this method is accurate.It can be used for sterility test of Famotidine for Injection.

　　【Key words】Famotidine for Injection;Test of sterility(Membrane filtration method);testing and verifying of the method

　　注射用法莫替丁是一種呱基噻唑類的H2受體拮抗劑，對胃酸分泌有明顯的抑製作用。市場上銷售非常大，為確保臨床用藥安全，中國藥典2005年版二部規定需做無菌檢查。本實驗旨在按中國藥典2005年版二部所載無菌檢查法（附錄取ⅪH）建立法莫替丁注射液的無菌檢查法。

　　1  材料和試藥

　　1.1  供試品 

　　注射用法莫替丁（規格：20mg/支，批號：060103，生產廠家：山西康寶生物製品股份有限公司）。

　　1.2  培養基及衝洗液 

　無菌檢查用硫乙醇酸鹽液體培養基（批號：050412）改良馬丁培養基（批號：060315）營養肉湯培養基（批號：050919）營養瓊脂培養基（批號：060330）蛋白腖（批號：060524）。上述試劑試藥均由北京三藥科技開發公司提供。

　　1.3  驗證實驗用菌種（第三代） 

　　①金黃色葡萄球菌(Staphylococcus)[CMCC(B)26 003]②銅綠假單胞菌(Pseudomonas aeruginosa)[CMCC(B)10 104]③枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)[CMCC(B)63 501]④生孢梭菌(Clostridium sporogenes)[CMCC(B)64 941]⑤白色念珠菌(Candida albicans)[CMCC(F)98 001]⑥黑曲黴(Aspergillus niger)[CMCC(F) 98 003]

　　1.4  儀器和濾器

 

　　HTY-2000A集菌儀及全封閉式無菌過濾器（廠家：杭州泰林生物設備有限公司）。

2  方法和結果

　　2.1  菌液製備

　　2.1.1  分別取金黃色葡萄球菌、銅綠假單孢菌、枯草芽孢杆菌的新鮮培養物至營養肉湯中，於35℃培養18～24h，用0.9%氯化鈉溶液稀釋至50～100cfu/ml（用營養瓊脂培養基雙碟法計數），備用。

　　2.1.2  取生孢梭菌的新鮮培養物至硫乙醇酸鹽培養基中，於35℃培養18～24h，用0.9%氯化鈉溶液稀釋至50～100cfu/ml（用硫乙醇酸鹽培養基中計數），備用。

　　2.1.3  取白色念珠菌的新鮮培養物至改良馬丁培養基中，於25℃培養24h，用0.9%氯化鈉溶液稀釋至50～100cfu/ml（用玫瑰紅鈉瓊脂培養基雙碟法計數），備用。

　　2.1.4  取黑曲黴菌的新鮮培養物至改良馬丁培養基中，於25℃培養6d，加4ml 0.9%氯化鈉溶液將孢子洗脫，取洗脫液用0.9%氯化鈉溶液稀釋至50～100cfu/ml（用改良馬丁瓊脂培養基雙碟法計數），備用。

　　2.2  菌液計數

　　2.2.1  每種菌液接種2個平皿，取平均值。

　　2.2.2  取上述6種菌液，金黃色葡萄球菌、銅綠假單孢菌、枯草芽孢杆菌、生孢梭菌各1ml用營養瓊脂培養基注皿35℃培養；白色念珠菌、黑曲黴菌各1ml用改良馬丁瓊脂培養基注皿25℃培養，計數。表1 細菌和真菌計數結果（略）注：菌數為2個平皿的平均數。

 

　　2.3  試驗方法 

　　薄膜過濾法，取一次性封閉集菌器（二聯）一套，在一管中先泵入培養基並夾緊管口，取本品10瓶按薄膜過濾至另一管，用0.1%蛋白腖水溶液分3次衝洗，每次100ml，泵入相同培養基，於兩管中分別接入小於100cfu/ml的試驗菌。前者作為陽性對照管；陰性對照管分別將改良馬丁培養基及硫乙醇酸鹽培養基泵入兩個集菌器中並培養，按規定溫度將上述集菌器培養3～5d，各試驗菌同法操作。結果六株陽性對照菌正常生長，見表2。表2 各組菌種生長情況（略）注：試驗組：樣品+菌+培養基；對照組：菌+培養基；陰性對照組：改良馬丁培養基及硫乙醇酸鹽培養基。

　　2.4  樣品的無菌檢查

　　取本品30瓶，按薄膜過濾法至一次性全封閉集菌器（三聯）中，用0.1%蛋白腖水溶液分3次衝洗，每次200ml，兩管加入硫乙醇酸鹽培養基（其中一管接入小於100cfu/ml的金黃色葡萄球菌作為陽性對照管），第三管加入改良馬丁培養基，按規定溫度培養14d，逐日觀察，供試品管均澄清，陽性對照管生長良好，判定供試品符合規定。

　　3  討論

因為注射用法莫替丁是化學藥品，所以前兩次驗證實驗均采用沒有衝洗的薄膜過濾法，結果該檢驗量的注射用法莫替丁在該檢驗條件下對生孢梭菌有抑製作用，改用0.1%蛋白腖水溶液衝洗才消除其抑菌成分，從而避免了假陽性的出現，提高了陽性檢出率，保證了結果的準確性。所以，從結果可以看出方法驗證的重要性，即采用的方法條件是否適合於該品種的無菌檢查具有重要意義。

 

 作者：李儼 薑麗 裴明日  《中國中醫藥雜誌》

【參考文獻】

  　　[1] 中華人民共和國藥典[S]．二部，2005，89．

　　[2] 中國藥品生物製品檢定所．中國藥品檢驗標準操作規程[S]．

[3] 蘇德模．微生物學檢驗手冊[S]．科學出版社，2000．