竹醋液體外抗皮膚癬菌活性的研究

【摘要】  目的 研究竹醋液的體外抗真菌作用。方法 采用體外真菌藥敏試驗方法測定竹醋液對10種臨床上常見的致病性皮膚癬菌和白色念珠菌的最小抑菌濃度(MIC)和最小殺菌濃度(MBC)。結果 竹醋液對皮膚癬菌的MIC在1:256～1:32， MBC在1:128～1:8之間；對白念珠菌的MIC在1:32～1:16，MBC在1:16～1:8之間。結論 竹醋液對皮膚癬菌具有較強的抑菌和殺菌效果。

【關鍵詞】  竹醋液；最小抑菌濃度(MIC)；最小殺菌濃度(MBC)

    竹醋液是在竹材熱解過程中收集的一種液體混合物，液體呈青黃色或黃棕色，具獨特的煙熏味。主要由水、有機酸、酚類、酮類、醇類等物質組成，成分相當複雜，用途十分廣泛。國內外的研究都表明其具有廣譜的抑菌、消毒功能［1～3］。用竹醋液搽塗或稀釋浸泡，對治療腳癬效果較好。但竹醋液對致病性皮膚癬菌的抑製作用，尚未見係統性體外藥效學研究［4］。本研究采用體外真菌藥敏試驗方法測定了竹醋液對10種臨床上常見的致病性皮膚癬菌和白色念珠菌的最小抑菌濃度(MIC)和最小殺菌濃度(MBC)。現報道如下。

    1  材料與方法

    1．1  供試樣品  竹醋液原液由浙江遂昌文照竹炭有限公司提供；再經實驗室不同配方和工藝處理後，分為1～3號樣品。

    1．2  受試真菌

    1．2．1  標準菌株  4個屬10個種，每種各1株，分別是表皮癬菌屬：絮狀表皮癬菌；小孢子菌屬：犬小孢子菌和石膏樣小孢子菌；毛癬菌屬：紅色毛癬菌、須癬毛癬菌、斷發毛癬菌、紫色毛癬苗、許蘭氏毛癬菌和同心性毛癬菌；念珠菌屬：白念珠菌。均引自中國醫學科學院皮膚病學研究所真菌菌種保存中心。

    1．2．2  培養基  以不含任何抗生素的沙堡瓊脂和沙堡液基作為基礎培養基。

    1．3  方法

    1．3．1  最小抑菌濃度(MIC)的測定  采用沙堡瓊脂培養基稀釋法（試管法）［5］。

    1．3．1．1  藥液培養基的製備  將3個竹醋液樣品用 V/V 的方法進行稀釋。取無菌試管11支，排成一排，除第1管隻加入20ml藥基原液外，其餘每管加入滅菌蒸餾水20ml，在第2管加入藥基原液20ml混勻，然後吸取20ml至第3管，混勻後再吸取20ml至第4管，如此連續倍比稀釋至第9管，並從第9管中吸取20ml棄去，第10管為不含供試藥液的基礎生長對照，第11管為溶媒對照。此時1～9管藥基濃度依次為1:1、1:2、1:4、1:8、1:16、1:32、1:64、1:128、1:256。然後各管分別與滅菌後的倍量沙堡瓊脂20ml混勻，再另分裝每管3.5ml，製成斜麵，最終使藥基濃度分別為：(1)1:2；(2)1:4；(3)1:8；(4)1:16；(5)1:32；(6)1:64；(7)1:128；(8)1:256；(9)1:512；(10) 基礎對照；（11）溶媒對照。餘樣操作同前。

    1．3．1．2  菌懸液的製備及接種  挑取1菌環新培養真菌菌落(種於沙保瓊脂培養基)混懸於2m1生理鹽水中振蕩15 min，使之充分混勻，將其濁度調至1.0～10×105 CFU／ml。用微量加樣器從第1管至第10管順序每管加50μl懸液，混勻，放入26℃溫箱，皮膚癬菌培養7天，白念珠菌培養48h，觀察並記錄抑菌結果。

    1．3．2  最小殺菌濃度(MBC)測定  將菌未生長示有抑菌作用的各藥基管中，分別加入1.5ml沙堡基礎液基，放置 26 ℃孵育 2h，充分震蕩將原接種的菌液洗脫在液體培養基中，再將液體培養基傾入事先準備好的含有3.5ml沙堡液基的滅菌試管中，此時總液體量為 5ml，混勻後放入26℃溫箱，皮膚癬菌培養7天，白念珠菌培養48h，觀察並記錄殺菌結果。

1．3．3  結果判定

    1．3．3．1  最低抑菌濃度 (MIC)  以沙堡瓊脂培養基基礎對照管菌已生長為參照，藥基管中菌未生長示有抑菌作用。菌未生長的最低藥物濃度管就是該提取液對該菌的最低抑菌濃度(MIC) ，用 V/V 表示。

    1．3．3．2  最低殺菌濃度 (MBC)  先測出M1C，然後經再培養後，在液體培養基中菌又生長為僅有抑菌作用，無殺菌作用；菌仍未生長的為殺菌作用，菌仍未生長的最低藥物濃度管就是該提取液的最低殺菌濃度(MBC)，用 V/V 表示。

    2  結果

    竹醋液1～3號樣品對標準菌株的最小抑菌濃度和最小殺菌濃度測定  竹醋液1號樣品對7株的MIC為1：256，對2株的MIC為1：128，對1株的MIC為1：32,而且5株的MBC高出MIC1倍，其餘菌株的MBC高出MIC2～4倍。竹醋液3號樣品的MIC與1號樣品基本相同，而MBC高出MIC1倍有6株。竹醋液2號樣品的MIC僅1株為1：256，6株為1：128，MBC有7株為1：64。見表1～3。 表1  竹醋液1號對10種常見致病皮膚菌的ＭＩＣ和ＭＢＣ表2  竹醋液2號 對10種常見致病皮膚菌的ＭＩＣ和ＭＢＣ表3  竹醋液3號對10種常見致病皮膚菌的ＭＩＣ和ＭＢＣ注：“＋”菌已生長示無抗菌作用；“△”在藥基上菌未生長，轉種到沙堡液基中菌又生長，示僅有抑菌作用，無殺菌作用；“-”在藥基上菌未生長，轉種到沙堡液基中菌仍未生長，示既有抑菌作用又有殺菌作用。

    3  討論

    本研究表明，竹醋液1～3號樣品對4屬 10種常見致病菌均有較好的抑菌和殺菌作用，1號樣品和3號樣品結果基本一致，其中對毛癬菌、絮狀表皮癬菌和白念珠菌的殺菌作用3號樣品比1號樣品高出2倍。兩者均比2號樣品抗菌作用強約為1倍以上。

    3個竹醋液樣品的工藝處理和配方不同，因此在抗菌作用方麵顯示出一定的差異，試驗結果表明，1號和3號樣品具有進一步研究開發的潛力。

3個樣品對4屬10種常見致病真菌的抗菌結果表明，竹醋液對皮膚癬菌有較強的優勢(MIC在1:256～1:32，MBC在1: 128～1:8之間)；對白念珠菌作用稍弱(MIC在1:32～1:16，MBC在1: 16～1:8之間)。提示竹醋液是一種高效的殺菌劑，這為臨床應用竹醋液治療常見的皮膚癬菌和白色念珠菌引起的癬疾提供了理論依據。竹醋液作為竹炭生產過程中的主要副產物，屬純天然原料，價廉易得。以竹醋液作為抗皮膚真菌新藥進行深入研究，具有一定開發和應用前景。

 

 作者：錢華，王衍彬，柏明娥 《中國實用醫藥雜誌》

  1 Sulaiman O，Murphy RJ，Hashim R，et al．The inhibition of microbial growth by bamboo vinegar.Journal of Bamboo and Rattan, 2005, l4(1)：71-80.

2 常雅寧，俞建瑛，倪煒，等．竹醋液對食品汙染菌的抗菌作用的研究．林產化學與工業，2005，25（4）：83-85.

3 李忠琴，許小平，陳傑波，等．竹瀝抗深部感染真菌的研究．中國新醫藥，2004，3（1）：13-14.

4 李忠琴，歐敏銳，許小平，等．竹醋液抑製腐敗菌的作用研究．食品科技，2003，（7）：78-80.

5 Atilla Ardoana, Aylin Ateb, Volkan Zola, et al．Tinea cruris in Routine.Urology Practice Urologia Internationalis，2005，74：346-348.