川產習用金銀花的抑菌作用研究

【摘要】  　　目的 探討川產習用金銀花的抑菌作用。方法平板打孔法。結果川產習用金銀花在體外對金黃色葡萄球菌、大腸杆菌、福氏誌賀菌、卡他球菌有比較明顯的抑製作用，對溶血性鏈球菌和鼠傷寒沙門菌不太敏感。結論為川產習用金銀花的利用和深入研究提供了科學參考。　

【關鍵詞】  川產習用品種；金銀花；體外抑菌; 平板打孔法

　　Abstract:ObjectiveTo research the antibacterial activity of  varieties of Flos Lonicerae produced in Sichuan.MethodsBeating holes method.ResultsVarieties of Flos Lonicerae had obvious antibacterial activity for the bacterium of Staphylococcus aureus，Escherichia coli，Shigella flexneri and Branhamella catarrhlis，and hadn't obvious antibacterial activity for the bacterium of Staphylococcus haemolyticus, Salmonella typhimurium.ConclusionThe results provide some references for the utility and further study of varieties of Flos Lonicerae  produced in Sichuan.

　　Key words:Variety  produced in Sichuan；  Flos Lonicerae；  Antibacterial activity in vitro;  Beating holes method

　　金銀花Flos Lonicerae為常用中藥，具有清熱解毒、通經活血、疏風散熱之功效。2005年版《中國藥典》規定金銀花為忍冬科Caprifoliaceae植物忍冬Lonicera japonica Thunb.的幹燥花蕾或初開的花［1］，但我國作為中藥金銀花流通及使用的品種卻是複雜的［2］。四川地處西南，為我國金銀花主要產區之一，品種比較複雜。為了客觀評價其品質，我們測定了川產金銀花主要有效成分綠原酸的含量［3］。本實驗以道地正品金銀花河南密縣“密銀花”作對照，用平板打孔法對川產金銀花品種細氈毛忍冬L.similis var.similis，淡紅忍冬L.acuminata，紅腺忍冬L.hypoglauca，峨嵋忍冬L.similis var.omeiensis進行了體外抑菌作用研究。

　　1  材料

　　1.1  藥物川產習用金銀花細氈毛忍冬、淡紅忍冬、紅腺忍冬、峨嵋忍冬經成都中醫藥大學萬德光教授鑒定，“密銀花”委托河南中醫學院曹繼華教授采集鑒定。

　　1.2  菌種金黃色葡萄球菌（Staphylococcus aureus）、溶血性鏈球菌（Staphylococcus haemolyticus）、大腸杆菌（Escherichia coli）、福氏誌賀菌（Shigella flexneri）、鼠傷寒沙門菌（Salmonella typhimurium）、肺炎球菌（pneumonococcus）由四川衛生幹部學院微生物教研室提供；卡他球菌（Branhamella catarrhlis）、表皮葡萄球菌（Staphylococcus epidermidis）由成都中醫藥大學微生物教研室提供。

　　1.3  試劑瓊脂粉和蛋白腖（購自廣州海洋生物有限公司）、牛肉浸出粉（購自靈武市泰運生化製品有限公司）、脫纖維兔血（自製）、分析純氯化鈉等。

　　2  方法

　　2.1  培養基的製備

　　2.1.1  營養肉湯培養基［4］取蛋白腖、牛肉浸出粉、氯化鈉、蒸餾水，按《中國藥典》規定比例混合，微溫溶解後，調節pH為弱堿性，煮沸，濾清，調節pH值使滅菌後為7.2±0.2，在115℃滅菌30 min。

2.1.2  營養瓊脂培養基［4］照上述營養肉湯培養基的處方及製法，按《中國藥典》規定比例加入適量瓊脂，調節pH值使滅菌後為7.2±0.2，在115℃滅菌30 min。

　　2.1.3  血瓊脂培養基［5］將營養瓊脂培養基加熱溶化，待冷至50℃左右，以無菌操作加入10%無菌脫纖維兔血，搖勻，置冰箱備用。

　　2.2  菌液的製備於實驗前將上述保存菌種於相應的瓊脂平板上劃線，於37℃培養箱內培養48 h，取出，用白金環挑起典型菌落接種營養肉湯管中，為了溶血性鏈球菌、肺炎球菌的生長，後二者需要在血瓊脂培養基中培養，經過37℃下培養24 h，將菌液稀釋成1×107 cfu·ml-1，供實驗備用。

　　2.3  供試液的製備稱取川產習用金銀花藥材及“密銀花”各5 g，分別加蒸餾水適量，煎煮3次，第1次40 min，後兩次各30 min，分別合並水煎液，濃縮至6 ml，分別定容於消過毒的10 ml容量瓶中，各得500 mg·ml-1的供試液，冰箱中保存備用。

　　2.4  抑菌實驗將溶血性鏈球菌、肺炎球菌菌液0.1 ml滴在血瓊脂培養基上，其它菌液0.1 ml滴在營養瓊脂平板上，用無菌L型玻棒塗布均勻。用6 mm直徑打孔器打孔，每平板打孔3個，除取孔內瓊脂，並向每孔內加藥液約0.1 ml，放置37℃培養箱內培養18～24 h，觀察並記錄抑菌環直徑。結果見表1。表1  抑菌實驗結果（略）

　　3  小結

參照《微生物和檢驗技術》判定結果［6］，抑菌圈直徑≥20 mm為高敏；抑菌圈直徑為10～19 mm為中敏；抑菌圈直徑<10 mm為鈍敏。可見川產4種習用金銀花對金黃色葡萄球菌高敏，而“密銀花”對其為中敏；5種金銀花對溶血性鏈球菌和鼠傷寒沙門菌基本都為鈍敏（抑菌環直徑沒有大於10 mm）；肺炎球菌對峨嵋忍冬高敏，對細氈毛忍冬和紅腺忍冬中敏，對淡紅忍冬和“密銀花”鈍敏；卡他球菌對紅腺忍冬和峨嵋忍冬高敏，對其它3種金銀花中敏；表皮葡萄球菌對峨嵋忍冬高敏，對細氈毛忍冬和淡紅忍冬中敏，對紅腺忍冬和“密銀花”鈍敏；大腸杆菌對細氈毛忍冬和峨嵋忍冬高敏，對其它3種金銀花中敏；福氏誌賀菌對細氈毛忍冬、淡紅忍冬和峨嵋忍冬高敏，對其它兩種金銀花中敏。

作者：苟占平，萬德光《時珍國醫國藥》

【參考文獻】

  　［1］國家藥典委員會.中國藥典,Ⅰ部［S］.北京：化學工業出版社，2005：152.

　　［2］徐炳聲.中藥金銀花原植物的研究［J］.藥學學報，1979，14（1）：23.

　　［3］苟占平，萬德光.HPLC法測定5種1變種金銀花中綠原酸含量［J］.中國中醫藥信息雜誌，2004，11（5）：421.

　　［4］國家藥典委員會.中國藥典,Ⅱ部［S］.北京：化學工業出版社，2005：附錄83.

　　［5］王彩玉. 常用細菌培養基製備及注意事項［J］.衛生職業教育，2004，23（12）：102.

［6］楊建江，韓文瑜，杜 銳，等.30種中草藥對耐藥性豬鏈球菌的抑菌試驗［J］.中獸醫醫藥雜誌，2004，23（2）：14.

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