蛭弧菌（Bdellovibro，簡稱BD）是革蘭陰性細菌，並可以通過裂解其寄生的革蘭陰性細菌維持自身的生長發育[1]。目前，對蛭弧菌的研究主要集中在海水中，對淡水中的研究則很少。本實驗利用普通蛋白腖培養基和營養肉湯兩種培養基，采用描點法[2]、單層培養法[3]及雙層培養法[4]，對淡水環境中的噬菌蛭弧菌樣品進行分離培養，以期找出最適合的培養方法及培養基。
1 材料與方法
1.1 原料
淡水樣品采自阿哈湖水庫，梯度稀釋至10-3倍。蛋白腖培養基（Pp20）下層板(固體):
1.2 方法
描點法:將宿主菌分別塗布在蛋白腖培養基（固體）和營養肉湯培養基（下層膠）上，用毛細吸管蘸一下樣品，點樣於在培養基不同位置。單層塗布法：將宿主與樣品混合，搖勻後直接塗布在蛋白腖培養基（固體）和營養肉湯培養基（下層膠）上。雙層平板培養法：首先將蛋白腖培養基（固體）和營養肉湯培養基（下層膠）倒平板、凝固，將0.5 ml宿主，5 ml樣品和5 ml上層膠充分混合，倒在下層膠上。3種方法點樣後
1.3 噬菌蛭弧菌的檢測
收取生成的噬菌斑，用16SrRNA基因特異性探針作引物進行PCR擴增，檢測所得的細菌是否噬菌蛭弧菌。
2 結果
2.1 噬菌斑
描點法點樣後培養2～3 d，並無明顯的噬菌斑生成。單層塗布法培養2～3 d後，在營養肉湯培養基上看到少數幾個小噬菌斑生成，噬菌斑形狀不規則（圖1）；而在蛋白腖培養基上未見噬菌斑的生成，雙層培養法蛋白腖培養基上有明顯的、大塊的、圓形和不規則斑點（圖2），在營養肉湯的雙層培養基上也可看到有圓形，透明的噬菌斑產生，數量較多（圖3,表1），但小於雙層蛋白腖培養基上的斑塊。表1 3種培養方法生成的噬菌斑數（略）
2.2 PCR擴增檢測
用16SrRNA基因特異性探針作引物來進行PCR擴增，發現在蛋白腖培養及營養肉湯單層塗布法所得的斑點中所提取的細菌不能得到擴增條帶，而用營養肉湯培養的噬菌斑中可以得到蛭弧菌（圖4）。
3 討論
實驗結果表明，隻有用營養肉湯雙層培養後的活菌計數才能得到有效數字[8]。用描點法無法得到噬菌斑，這可能是由於所取樣品量太少，蛭弧菌的濃度太低而無法形成明顯的噬菌斑。雙層培養法可以有效地分離出蛭弧菌，可能因為雙層培養能給宿主和蛭弧菌一個更為穩定的生長環境，而且營養肉湯培養基的效果更好，可能由於培養基中牛肉浸汁和一些離子存在，不僅能使蛭弧菌得到培養，同時使宿主菌得到增長，為蛭孤菌生長提供優質的營養環境，故認為營養肉湯雙層培養是培養淡水蛭弧菌的最適方法。
作者：曾佳 《貴陽醫學院學報》
【參考文獻】
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