【摘要】 目的 研究黃連、黃芩對牙齦紫質單胞菌、中間普氏菌、核梭杆菌厭氧菌的體外抑菌活性，為臨床篩選中藥治療厭氧菌感染提供依據。方法將黃連、黃芩製成煎劑，采用美國臨床實驗室標準化委員會(NCCLS)推薦的瓊脂稀釋法，測定此2種藥物對3種細菌的最小抑菌濃度（MIC）。結果黃連對中間普氏菌的MIC為1∶640；對牙齦紫質單胞菌、核梭杆菌的MIC為1∶320。黃芩對牙齦紫質單胞菌、中間普氏菌的MIC為1∶10；對核梭杆菌的MIC為1∶20。結論 黃連、黃芩對上述3種試驗菌株均具有不同程度的體外抑菌活性，其中黃連對中間普氏菌的抑菌活性最強，黃芩對3種細菌雖然也顯示活性，但均較黃連弱。
【關鍵詞】 黃連；黃芩；瓊脂；微生物敏感試驗；細菌，厭氧
隨著抗生素的大量使用，各種細菌包括厭氧菌的耐藥率日趨升高。資料表明，厭氧菌可以通過產酶、細胞膜通透性改變、外排、線粒體突變、耐藥基因傳遞等機製導致耐藥率上升，而且長期使用抗生素治療還可能誘導菌群失調和真菌的二重感染［1～3］。因此，本研究選擇了3種致病性厭氧菌牙齦紫質單胞菌、中間普氏菌、核梭杆菌作為研究對象，采用美國臨床實驗室標準化委員會(NCCLS)推薦的瓊脂稀釋法，檢測中藥黃連、黃芩對這3種厭氧菌的體外抑菌活性，以期為臨床應用中藥治療厭氧菌感染提供實驗依據。
1 材料與方法
1.1 材 料
牙齦紫質單胞菌（Pg ATCC33277）、中間普氏菌（Pi ATCC25611）、核梭杆菌（Fn ATCC10953）均由北京市口腔醫院研究所提供。
稱取黃連
Wilkins-Chalgren厭氧肉湯、Wilkins-Chalgren厭氧瓊脂、M-H瓊脂均購於英國OXOID公司。
比濁儀（美國DADE BERING公司），
1.2 方法
用Wilkins Chalgren 厭氧肉湯將牙齦紫質單胞菌、中間普氏菌、核梭杆菌分別複蘇，轉種至含5%V/V脫纖維羊血的Wilkins Chalgren 厭氧瓊脂平板上（該瓊脂粉中已含有氯化血紅素和維生素K），置厭氧環境中（80%N2，10%H2，10%CO2）
取9支無菌試管，第1管加入1 mL黃連煎劑，2～9管加入1 mL 0.9%氯化鈉注射液，第2管再加入1 mL黃連煎劑，2～9管依次做倍比稀釋。將Wilkins-Chalgren瓊脂融化，置於水浴中平衡置
用微量多點接種儀將製備好的牙齦紫質單胞菌、中間普氏菌、核梭杆菌懸液分別點種1 μL於含不同濃度的黃連、黃芩的Wilkins-Chalgren瓊脂平皿上，置厭氧環境中，
判讀黃連、黃芩能夠完全抑製細菌生長的最低藥液濃度為該中藥對細菌的最低抑菌濃度，即藥物最高稀釋度平皿上無菌落生長者，為該藥對該細菌的MIC［4］。
2 結 果
2.1 黃連對牙齦紫質單胞菌、中間普氏菌、核梭杆菌的MIC分別是1∶320（3.13 mg/mL）、1∶640（1.56 mg/mL）、1∶320（3.13 mg/mL）。
2.2 黃芩對牙齦紫質單胞菌、中間普氏菌、核梭杆菌的MIC分別是1∶10（100 mg/mL）、1∶10（100 mg/mL）、1∶20（50 mg/mL）。
2.3 中藥黃連、黃芩對牙齦紫質單胞菌、中間普氏菌、核梭杆菌3種厭氧菌均有不同程度的抑菌能力。其中黃連對中間普氏菌抑菌能力最明顯，比對牙齦紫質單胞菌、核梭杆菌高1個倍比稀釋度；黃芩對3種細菌也顯示了抑菌能力，但都是在比較高的濃度情況下才有抑菌作用，且抑菌能力均低於黃連。
3 討 論
3.1 中藥抑菌作用機製
黃連主要的抑菌成分是小檗堿，資料表明小檗堿能抑製酵母和細菌糖代謝中間環節丙酮酸的氧化脫羧過程，較大濃度時可顯示對核酸前體摻入的抑製作用，其抑製細菌核酸合成作用在一定濃度範圍內隨藥物濃度增大而增強［5］。黃酮類衍生物是黃芩的主要抑菌成分，具有清熱燥濕、瀉火解毒等功效。其有效成分可通過阻斷細菌的信號通訊通路，降解細菌的內毒素及其破壞細菌細胞生物膜等機製抑製金黃色葡萄球菌、溶血性鏈球菌、肺炎球菌等多種細菌的作用，具有較廣泛的抗菌譜［6］。
3.2 我們采用2001年美國NCCLS推薦的瓊脂稀釋法研究了黃連和黃芩對牙齦紫質單胞菌、 中間普氏菌、 核梭杆菌的抑製能力，黃連對這3種細菌抑製作用較強，黃芩較弱。黃芩MIC範圍在10～50 mg/mL，與其他研究結論不一致，可能與不同的研究方法有關，有觀點認為不同的方法得出的結果存在差異［7］，建議臨床試驗室應采用標準化的實驗方法，以達到研究結果的一致性。
3.3 隨著檢驗技術的提高，厭氧菌感染的檢出率不斷增加。而厭氧菌對臨床常用的氨基糖苷類、磺胺類藥物天然耐藥；厭氧菌也可通過誘導產酶、基因突變等機製導致對β-內酰胺抗生素高水平耐藥［8，9］，給厭氧菌感染治療帶來難度。而中藥具有資源豐富、價廉易得、毒副作用低等優點，因此篩選有效的中藥對治療厭氧菌感染具有很大的臨床意義。本實驗旨在通過采用標準化的實驗方法，為臨床應用中藥治療該類細菌感染提供準確的試驗依據。
作者：郭秀娟 鄭金秀 李宏 《河北中醫》
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