產ESBLs的大腸埃希菌和肺炎克雷伯菌耐藥性分析

超廣譜β-內酰胺酶(extended-spectrum-β- lactamases，ESBLs)由質粒基因編碼，通過轉導和轉化在細菌間擴散，水解含甲氧亞氨基的β-內酰胺類抗生素，是細菌對青黴素、頭孢菌素及單環類抗生素產生耐藥性的主要原因。ESBLs多由腸杆菌科細菌產生，其中以大腸埃希菌(Escherichia coli)和肺炎克雷伯菌(Klebsiella pneumoniae)最為常見[1]。為了解嘉興地區大腸埃希菌和肺炎克雷伯菌的感染率和耐藥率，本次研究對臨床分離的121株大腸埃希菌和101株肺炎克雷伯菌菌株標本中進行了ESBLs檢測，現報道如下。

　　1　資料和方法

　　1.1　材料

　　1.1.1　菌株來源　121株大腸埃希菌、101株肺炎克雷伯菌菌株取自2006年1月至2008年6月嘉興地區分離於各種感染性疾病患者送檢的痰液、咽拭子、尿液及靜脈血等標本，並經細菌學鑒定。藥敏試驗質控菌株大腸埃希菌ATCC25922和肺炎克雷伯菌ATCC700603均由浙江大學醫學院嚴傑教授提供。

　　1.1.2 細菌鑒定儀及主要藥敏紙片　細菌鑒定儀為VITEK-32微生物分析儀(由法國梅裏埃公司生產)。氨苄西林/舒巴坦(30μg / 10μg)、阿莫西林/棒酸(30μg /10μg)等藥敏紙片(由英國Oxoid公司生產)，其它藥敏紙片(由杭州天和微生物試劑有限公司生產)。

　　1.1.3　培養基及ESBLs檢測紙片　培養基采用M-H瓊脂(由杭州天和微生物有限公司生產)。ESBLs檢測紙片(由杭州天和微生物試劑有限公司生產)。

　　1.2　方法

　　1.2.1　細菌懸液的製備　將各菌株接種於M-H瓊脂平板上，37℃培養24 h，用滅菌0.9%氯化鈉溶液收集菌苔，3000 r/min離心30 min，取菌體沉澱用滅菌0.9%氯化鈉溶液重懸，采用麥氏比濁法稀釋至1×107 CFU/ml。

　　1.2.2　ESBLs檢測　藥物敏感試驗：采用K-B紙片擴散法。取上述各細菌懸液0.1 ml均勻塗布於直徑9 cm的M-H瓊脂平板上，貼上各藥物紙片，37℃培養24 h後觀察結果。采用美國國家臨床實驗室標準化委員會(NCCLS 2008版本)的標準判斷藥敏試驗結果[2]。

　　1.2.3　采用雙紙片協同試驗　取上述各細菌懸液0.1 ml均勻塗布於直徑9 cm的M-H瓊脂平板上，貼上ESBLs檢測紙片，37℃培養24 h後觀察結果，若於紙片周圍出現串聯的啞鈴狀沉澱環判為ESBLs陽性[3]。

　　1.2.4　統計學方法　采用SPSS 13.0統計學軟件。采用χ2檢驗對不同菌種ESBLs陽性率進行比較。設P<0.05為差異有統計學意義。

2　結果

　　2.1　ESBLs檢測陽性率　121株大腸埃希菌中，43株產ESBLs，陽性率為35.53%;101株肺炎克雷伯菌中，33株產ESBLs，陽性率為32.67%;兩種細菌ESBLs檢測陽性率比較差異無統計學意義(χ2=3.40, P>0.05)。

　　2.2　藥敏試驗結果　產ESBLs及不產ESBLs大腸埃希菌和肺炎克雷伯菌對17種抗生素的藥敏試驗結果見表1。

　　由表1可見， 對不產ESBLs大腸埃希菌和肺炎克雷伯菌對17種抗生素耐藥率明顯低於產ESBLs菌株(χ2=29.91~106.64, P 均<0.05)。

　　3　討論

　　目前檢測ESBLs的方法較多，有雙紙片協同試驗(double disk synergy test, DDS)、三維試驗、E-test、Vitek儀器鑒定等。DDS法為法國學者Jarlier等於1988年所建立，具有簡便、廉價等優點，對產ESBLs細菌的檢出率可達98%以上，適合臨床實驗室使用[2～4]。我國幅源遼闊，各地區、各醫院抗菌藥物使用情況差異較大，產ESBLs菌株流行情況、產ESBLs菌株耐藥性差異也較大，並有逐年增加的趨勢[5~7]。本次研究認為浙江嘉興地區大腸埃希菌和肺炎克雷伯菌ESBLs的檢出率分別為35.53%和32.67%，低於金華地區近年大腸埃希菌和肺炎克雷伯菌ESBLs的檢出率[8]。

　　由於存在菌種接種效應，2004年NCCLs明確規定即使產ESBLs菌株體外敏感，也不能用於臨床治療。Paterson等[9]研究產ESBLs菌株感染病例，發現堅持用體外中介的三代頭孢菌素治療的病例，最終臨床治療全部失敗;其他病例采用體外藥敏敏感的三代頭孢菌試驗敏感的三代頭孢菌素治療，治療的失敗率為58%。本次研究表明本地區產ESBLs大腸埃希菌和肺炎克雷伯菌對第三代頭孢菌素的耐藥率很高，可能與頭孢菌素目前大量使用及使用不規範有關。建議減少第三代頭孢菌素作為產ESBLs菌株感染治療的一線用藥。

由於所有大腸埃希菌和肺炎克雷伯菌株均對碳青黴烯類抗生素亞胺培南敏感，本地區大腸埃希菌和肺炎克雷伯菌感染治療首選亞胺培南。產ESBLs大腸埃希菌和肺炎克雷伯菌對單環類β-內酰胺類的氨曲南均敏感、抑製劑複合抗生素阿莫西林/棒酸以及阿米卡星耐藥率僅為18.60%~27.27%，故在臨床上發現產ESBLs大腸埃希菌和肺炎克雷伯菌感染時，可考慮采用這些抗生素作為治療藥物。

作者：作者：孫誌華　吳森林　孫愛華

【參考文獻】
  　　1 Sridhar RN, Basavarappa KG, Krishna GL. Detection of extended spectrum beta-lactamase from clinical isolates in Davangere[J]. Indian J Pathol Microbiol, 2008, 51(4):497-499.
　　2 Clinical and Laboratory Standards Institute (CLSI). Perfor-mance standards for antimicrobial disk and dilution susce-ptibility tests for bacteria isolated from animals[S]. ThirdEdition. 2008.
　　3 Sanders CC, Barry AL, Waashington JA, et al. Detection of extended-spectrum-β-lactamase-producing members of the family Enterobacteriaceae with the Vitek ESBL test[J]. J Clin Microbiol, 1996, 34(12): 2997-3001.
　　4 Thomson KS, Sanders CC. Detection of extended-spectrum β-lactases in members of the family Enterobactenaceae: Comparison of thedouble-disk and three dimensional test[J]. Antimicrob Agents Chemother, 1992, 36(9): 1877-1882.
　　5 Yao F, Qian Y, Chen S, et al. Incidence of extended-spectrum beta-lactamases and characterization of integrons in extended-spectrum beta-lactamase-producing Klebsiella pneumoniae isolated in Shantou, China[J]. Acta Biochimica et Biophysica Sinica，2007, 39(7):527-532.
　　6 蘭全學, 劉衡川, 方梅. 致感染大腸埃希氏菌臨床分離株耐藥性研究[J]. 四川大學學報醫學版, 2005, 36(1):90-92.
　　7 肖慶忠, 蘇丹虹, 江潔華, 等. 廣州地區3500株革蘭陰性細菌的分布特征及耐藥性特點[J]. 第一軍醫大學學報, 2005, 25(2):132-138.
　　8 卜黎紅, 徐瑞龍, 也海深. 超廣譜β-內酰胺酶大腸埃希菌和肺炎克雷伯菌耐藥性分析[J].浙江預防醫學，2004, 16(10):11-12.
　　9 Patterson JE, Hardin TC, Kelly CA, et al. Association of antibiotic utilization measures and control of multiple-drug resistance in Klebsiella pneumoniae[J]. Infect Control Hosp Epidemiol, 2000, 21(4):455-458.

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