幾種細菌染色方法的改良

細菌是一類原核細胞型微生物。因菌體小半透明，要想更清楚地觀察其大小和形態，需經染色和顯微鏡放大後才能看到。常用的細菌染色法有單染法和複染法。複染法是用兩種以上的染料染色，可將細菌染成不同顏色，除可觀察細菌的形態外還能鑒別細菌。主要有革蘭染色法、抗酸染色法、特殊染色法［1］ 。筆者為了克服傳統染色方法存在的不足，將革蘭染色法、抗酸染色法、莢膜染色法、芽胞染色法等進行改良，經多年實驗教學實踐證明效果良好，報告如下。

 

　　1 材料與方法

    

　　1.1 革蘭染色法  （1）取含金黃色葡萄球菌和大腸埃希菌的混合菌液塗片、幹燥、固定;（2）染色:用結晶紫染液染1min，水衝洗;盧戈碘液染1min，水衝洗;0.4%複紅酒精溶液染30s，水衝洗;（3）吸幹後鏡檢［2］ 。

    

　　1.2 抗酸染色法  （1）取結核杆菌陽性的痰標本（已處理）塗片、幹燥、固定。（2）染色:將石炭酸複紅染液沸水浴10min，滴加2～3滴覆蓋菌膜染色5min，水衝洗，3%鹽酸酒精脫色30s，水衝洗;堿性美蘭複染30s，水衝洗。（3）吸幹後鏡檢［3］ 。

    

　　1.3 莢膜染色法  （1）取接種肺炎球菌死亡的小鼠腹腔液塗片、幹燥、固定;（2）染色:用石炭酸複紅染液染1min，水衝洗;95%酒精脫色5s水衝洗;20%鞣酸溶液媒染10min水衝洗;0.8%孔雀綠溶液染色1min，水衝洗;（3）吸幹後鏡檢［4］ 。

    

　　1.4 芽胞染色法  （1）取等量破傷風杆菌厭氧培養菌液和5%孔雀綠水溶液，放入小試管中充分混合，沸水浴20min;取上述混合液塗片、幹燥、固定;（2）用1%沙黃液複染10min，水衝洗;（3）幹後鏡檢。

 

　　2 結果與討論

    

　　2.1 革蘭染色  鏡下，金黃色葡萄球菌染成紫色、球形，為革蘭陽性菌;大腸埃希菌染成紅色、杆狀，為革蘭陰性菌。革蘭染色法是細菌學中最經典，應用最廣泛的染色法之一。脫色是影響革蘭染色的關鍵步驟，脫色時間長短直接關係到染色結果的準確性［5］ 。脫色過度則革蘭陽性菌可能被誤染為革蘭陰性菌，脫色不 夠則革蘭陰性菌可能被誤染為革蘭陽性菌，為此學生難以把握。現將原有四步染色法改為三步法，即把第三步酒精脫色和第四步複紅複染合並一步進行，使用0.4%複紅酒精溶液作為複染劑，可達到脫色和複染雙重目的。這樣，就可以避免學生在四步法中因脫色時間不易掌握而造成染色的失敗，減少重複性實驗，提高了教學效果。

    

　　2.2 抗酸染色  鏡下，結核分枝杆菌染成紅色，為抗酸菌;背景和其他菌被染成藍色，為非抗酸菌。傳統的方法是滴加石炭酸複紅染液於塗片上，用玻片夾夾住塗片以微火煙葉熱，保持染液冒蒸汽約5min，此法學生容易使染液蒸幹或使染液沸騰，從而影響染色效果和汙染環境。改良後的方法是將染液直接加熱改為水浴後使用，克服上述的缺點，且染色效果良好。適合實驗教學使用。

    

　　2.3 莢膜染色  鏡下，肺炎球菌菌體染成紅色（成雙排列），莢膜染成綠色，存在於菌體的周圍。傳統的莢膜染色是用結晶紫染液染色，菌體染成紫色，莢膜染成淡紫色或無色，菌體和莢膜之間反差小，不易分辨。改良後，增加了脫色、媒染、複染的步驟，使菌體和莢膜之間反差增大，易於觀察，可用於學生實驗和示教片的製作。

    

2.4 芽胞染色  鏡下，破傷風杆菌的菌體染成紅色，芽胞染成綠色。傳統的方法是滴加石炭酸複紅染液於塗片上並弱火加熱，使染液冒蒸汽約5min，此法染液用量大，且容易汙染衣物和實驗台。現改為菌液和染液混合水浴加熱初染，然後製備塗片、固定、複染，即節約時間，染液消耗又少，且菌體、芽胞對比鮮明。此法適用於教學標本片的製作。

 

作者：林君榮

作者單位：遼東學院醫學院病原微生物學教研室，《淮海醫藥》

【參考文獻】

［1］ 陳興保，主編.病原生物學和免疫學［M］.第5版.北京:人民衛生出版社，2005.97.

［2］ 黃元桐，崔 傑.革蘭氏染色法三步法與質量控製［J］.微生物學報，1996，36（1）:76-78.

［3］ 宋淑賢，聶 清.微生物學常用細菌染色方法的改進［J］.黑龍江醫藥科學，2001，24（1）:36.

［4］ 苗 芳，李連誌.實驗教學中幾種細菌染色的改變方法［J］.承德醫學院學報，2001，18（2）:152-153.

［5］ 郭積燕，主編.微生物檢驗技術［M］.北京:人民衛生出版社，2002.36.