細菌對於碳水化合物的代謝試驗原理為：由於細菌各自具有不同的酶係統，對糖的分解能力不同，有的能分解某些糖產生酸和氣體，有的雖能分解糖產生酸，但不產生氣體，有的則不分解糖。據此可對分解產物進行檢測從而鑒別細菌。具體試驗方法有：①糖類發酵試驗是鑒定細菌最常用的生化反應，特別是對腸杆菌的鑒定尤為重要；②葡萄糖代謝類型鑒別試驗；③七葉苷水解試驗；④澱粉水解試驗；⑤甲基紅試驗；⑥V-P試驗；⑦β-半乳糖苷酶試驗（ONPG試驗）。
1.糖（醇、苷）類發酵試驗
（1）原理：由於各種細菌含有發酵不同糖（醇、苷）類的酶，故分解糖類的能力各不相同，有的能分解多種糖類，有的僅能分解1～2種糖類，還有的不能分解。細菌分解糖類後的終末產物亦不一致，有的產酸、產氣，有的僅產酸，故可利用此特點以鑒別細菌。
（2）培養基：在培養基中加入0.5%～1%的糖類（單糖、雙糖或多糖）、醇類（甘露醇、肌醇等）、苷類（水楊苷等）。培養基可為液體、半固體、固體或微量生化管幾種類型。
（3）方法：將分離的純種細菌，以無菌操作接種到糖（醇、苷）類發酵培養基中，置培養箱中培養數小時至兩周後，觀察結果。若用微量發酵管，或要求培養時間較長時，應保持濕度，以免培養基幹燥。
（4）結果：接種的細菌，若能分解培養基中的糖（醇、苷）類產酸時，培養基中的指示劑呈酸性反應。若產氣可使液體培養基中倒管內或半固體培養基內出現氣泡，固體培養基內有裂隙等現象。若不分解，培養基中除有細菌生長外，無任何其他變化。
（5）應用：是鑒定細菌最主要和最基本的試驗，特別對腸杆菌科細菌的鑒定尤為重要。
2.氧化-發酵試驗（O/F試驗）
（1）原理：細菌在分解葡萄糖的過程中，必須有分子氧參加的，稱為氧化型。氧化型細菌在無氧環境中不能分解葡萄糖。細菌在分解葡萄糖的過程中，可以進行無氧降解的，稱為發酵型。發酵型細菌無論在有氧或無氧的環境中都能分解葡萄糖。不分解葡萄糖的細菌稱為產堿型。利用此試驗可區分細菌的代謝類型。
（2）培養基：Hugh-Leifson培養基醫學教|育網搜集整理。
（3）方法：將待檢菌同時穿刺接種兩支HL培養基，其中一支培養基滴加無菌的液體石蠟（或其他礦物油），高度不少於1cm.將培養基於35℃培養48h或更長。
（4）結果：兩支培養基均無變化為產堿型或不分解糖型；兩支培養基均產酸為發酵型；若僅不加石蠟的培養基產酸為氧化型。
（5）應用：主要用於腸杆菌科細菌與非發酵菌的鑒別，前者均為發酵型，而後者通常為氧化型或產堿型。也可用於葡萄球菌與微球菌間的鑒別。
3.β-半乳糖苷酶試驗（ONPG試驗）
（1）原理：有的細菌可產生β-半乳糖苷酶，能分解鄰-硝基酚-β-D-半乳糖苷（ONPG），而生成黃色的鄰-硝基酚，在很低濃度下也可檢出。
（2）試劑：0.75M ONPG溶液：取80mg溶於15ml蒸餾水中，在加入緩衝液（6.9g NaH2P04溶於45ml蒸餾水中，用30% NaOH調整pH為7.0，再加水至50ml）5ml，置4℃冰箱中保存。0NPG溶液為無色，如出現黃色，則不應再用。
（3）方法：從克氏雙糖鐵培養基上取菌，於0.25ml無菌生理鹽水中製成菌懸液，加入一滴甲苯並充分振搖，使酶釋放。將試管置37℃水浴5min，加入0.25ml ONPG試劑，水浴20min～3h觀察結果。
（4）結果：菌懸液呈現黃色為陽性反應，一般在20～30min內顯色。
（5）應用：迅速及遲緩分解乳糖的細菌ONPG試驗為陽性，而不發酵乳糖的細菌為陰性。本實驗主要用於遲緩發酵乳糖菌株的快速鑒定。
4.七葉苷水解試驗
（1）原理：有的細菌可將七葉苷分解成葡萄糖和七葉素，七葉素與培養基中枸櫞酸鐵的二價鐵離於反應，生成黑色的化合物，使培養基呈黑色。
（2）培養基：七葉苷培養基、膽汁七葉苷培養基。
（3）方法：將待檢菌接種於七葉苷培養基中，培養後觀察結果。
（4）結果：培養基變為黑色為陽性，不變色者為陰性醫學教|育網搜集整理。
（5）應用：主要用於D群鏈球菌與其他鏈球菌的鑒別，前者陽性，後者陰性。也可用於革蘭陰性杆菌及厭氧菌的鑒別。
5.甲基紅試驗
（1）原理：某些細菌在糖代謝過程中，分解葡萄糖產生丙酮酸，丙酮酸可進一步分解，產生甲酸、乙酸、乳酸等，使培養基的pH降至4.5以下，當加入甲基紅試劑則呈紅色，為甲基紅試驗陽性。若細菌分解葡萄糖產酸量少，或產生的酸進一步轉化為其他物質（如醇、酮、醚、氣體和水等），則培養基的酸度仍在pH6.2以上，故加入甲基紅指示劑呈黃色，是為陰性。
（2）培養基：葡萄糖蛋白腖水培養基。
（3）方法：將待檢菌接種於上述培養基中，培養2～4d，於培養基內加入甲基紅試劑，立即觀察結果。
（4）結果：呈現紅色為陽性；橘紅色為弱陽性；黃色為陰性。
（5）應用：主要用於鑒別大腸埃希菌與產氣腸杆菌，前者為陽性，後者為陰性。此外腸杆菌科中沙門菌屬、誌賀菌屬、枸櫞酸杆菌屬、變形杆菌屬等為陽性，而腸杆菌屬、哈夫尼亞菌屬則為陰性醫學教|育網搜集整理。
6.V-P試驗
（1）原理：某些細菌在糖代謝過程中，分解葡萄糖產生丙酮酸，丙酮酸脫羧產生乙酰甲基甲醇，乙酰甲基甲醇在堿性環境中，被空氣中的氧氧化為二乙酰，進而與培養基內蛋白腖中精氨酸所含的胍基起作用，生成紅色化合物，則為V-P試驗陽性。若培養基中胍基含量較少，則可加入少量含胍基化合物，如肌酸或肌酐等。試驗時加入a-萘酚可加速此反應。
（2）培養基：葡萄糖蛋白腖水培養基醫學教|育網搜集整理。
（3）方法：將待檢菌接種於上述培養基中，於35℃培養48h後加入甲液（6% α-萘酚酒精溶液）和乙液（40% KOH溶液），振搖。
（4）結果：在數分鍾內出現紅色為陽性；如無紅色出現且於35℃4h後仍如故者即為陰性。
（5）應用：本試驗常與甲基紅試驗一起使用，因為前者陽性的細菌，後者通常為陰性。
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