葡萄糖氯化鈉注射液細菌內毒素檢查方法的研究

1　實驗材料

　　細菌內毒素國家標準品(批號981，9000 EU/支，中國藥品生物製品檢定所)，鱟試劑(0.5 EU^．ml^-1，0.1 ml^．支^-1，生產廠：①廈門鱟試劑廠，批號980622。②湛江海洋生物製品廠，批號980417。③湛江安度斯生物有限公司，批號981111)。葡萄糖氯化鈉注射液(本院製劑室及唐山吉祥藥業生產)，細菌內毒素檢查用水(批號97-1S，10 ml^．支^-1，中國藥品生物製品檢定所)。

2　方法及結果

2.1　鱟試劑靈敏度複核試驗　所用鱟試劑均進行靈敏度複核。以細菌內毒素檢查用水將細菌內毒素國家標準品稀釋成不同濃度，按文獻^［1］方法進行操作，觀察結果，計算各鱟試劑靈敏度實測值(λc)，結果均符合藥典規定。見表1。

表1　三個不同廠生產的鱟試劑靈敏度複核試驗結果.

注：λ＝0.5 EU^．ml^-1

2.2　細菌內毒素限值的確定　根據藥品細菌內毒素限值L＝K/M^［2］，K為細菌內毒素的致熱閾，為5 EU^.kg^-1.h^-1；M為熱原檢查劑量，葡萄糖氯化鈉注射液為10 ml^.kg^-1.h^-1；計算結果L＝0.5 EU^.ml^-1。
2.3　幹擾試驗最大有效稀釋倍數　L值確定後，根據所用鱟試劑的標示靈敏度(λ)確定樣品稀釋倍數。最大有效稀釋倍數MVD＝L/λ，本實驗采用λ為0.5 EU^.ml^-1的鱟試劑，因此，葡萄糖氯化鈉注射液MVD＝1，即采用原液不必稀釋。
2.4　幹擾試驗　用供試品將細菌內毒素國家標準品稀釋成1，0.5，0.25，0.125 EU^.ml^-14個濃度的溶液，采用3個不同廠生產的鱟試劑分別進行幹擾試驗，具體操作步驟按文獻［1］的方法，觀察結果並計算λc值，按中國藥典規定，若0.5 λ≤λc≤2λ(λ=0.5 EU^.ml^-1)，則證明供試品對BET無幹擾。結果見表2。

表2　葡萄糖氯化鈉注射液幹擾試驗

2.5　對照試驗　按照文獻［1］方法對本院製劑室生產的3批葡萄糖氯化鈉注射液進行熱原檢查，結果均符合規定。將本院製劑室和唐山吉祥藥業生產的葡萄糖氯化鈉注射液各3批按文獻方法^［3］分別進行細菌內毒素檢查，見表3。

表3　葡萄糖氯化鈉注射液兩種細菌內毒素檢查方法對照試驗結果

注：+—表示陽性結果；-—表示陰性結果

3　討　論

　　采用3個不同廠家生產的鱟試劑分別進行葡萄糖氯化鈉注射液細菌內毒素幹擾試驗，從表2可以看到，結果基本一致，其中湛江安度斯生產的鱟試劑幹擾試驗結果與靈敏度複核結果完全相同，測得λ_c值均在不幹擾範圍之內，故葡萄糖氯化鈉注射液的BET采用其中任一廠生產的鱟試劑均可。本實驗證實葡萄糖氯化鈉注射液對BET無幹擾作用，所以，選擇λ=0.5 EU^.ml^-1的鱟試劑直接進行BET即可。
　　由表3可知，本院製劑室和唐山吉祥藥業生產的葡萄糖氯化鈉注射液分別進行細菌內毒素檢查，其結果與熱原檢查結果均一致。因此，葡萄糖氯化鈉注射液采用細菌內毒素檢查法替代熱原檢查法是可行的。

作者單位：劉曉紅（唐山063000唐山市工人醫院）　
　　　　　李治田（唐山063000唐山市工人醫院）　
　　　　　王新華（唐山063000唐山市工人醫院）

參考文獻：

［1］中國藥典1995年版.二部.1995：附錄76.
［2］黃清泉，夏振民.藥品細菌內毒素檢查的試驗設計.中國藥學雜誌，1997，32(2)：72.
［3］中國藥典1995年版1998年增補本.1998：142.

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