口服藥品中大腸菌群與大腸杆菌檢出率比較試驗

作者：杜平華 朱世真（山東省青島市藥品檢驗所）

摘要　目前我國口服藥品衛生標準規定為1克（ml）不得檢出大腸杆菌，與國際上藥品微生物限度標準及我國食品衛生標準存在一定的差距。為此，我們對60批樣品進行大腸杆菌和大腸菌群檢出率進行考查，結果表明大腸菌群作為口服藥品控製菌將使藥品有更高的安全性。
　　關鍵詞　口服藥品　衛生標準　大腸杆菌　大腸菌群
　　大腸杆菌為腸杆菌科埃希氏菌屬的一個種［1］，我國把它作為藥品衛生標準的指示菌，該菌除乳糖發酵外，還需做生化試驗進行鑒定，如靛基質、甲基紅、V-P、枸櫞酸鹽利用試驗［2］。由於細菌受環境影響，可發生變異，尤其是中藥，往往出現漏檢及假陽性，所以大腸杆菌及其檢驗結果不能代表藥品的衛生狀況。大腸菌群是腸杆菌科一群能發酵乳糖產酸、產氣的需氣和兼性厭氧的革蘭氏陰性無芽胞杆菌，它們都是來源於人畜糞便，故國際上以大腸菌群作為藥品、食品、飲料等汙染的指示菌。我們對60批藥材、原料及口服藥品進行了二法檢出率比較，結果有明顯差異。

1　試驗材料

1.1　樣品　藥材10批，中成藥39批，西藥8批，飼料3批。以上樣品全部由青島市藥品檢驗所提供。
1.2　培養基　膽鹽乳糖培養基（單料、雙料）；EMB瓊脂培養基；蛋白腖水培養基；磷酸鹽葡萄糖腖水培養基；枸櫞酸鹽培養基；乳糖發酵培養基。以上培養基均按中國藥典1995年版附錄配製。

2　試驗方法

2.1　供試液製備：按1995版《中國藥典》［4］供試液製備方法，將樣品製成1∶10供試液。2.1.1　大腸杆菌檢查：按1995版《中國藥典》“微生物限度檢查法”大腸杆菌檢查。2.1.2　大腸菌群檢查：①將上述1∶10供試液10倍稀釋成1∶100，取相當於供試品量的1.0g（ml）、0.1g（ml）、0.01g（ml）的供試液接種。即1∶10供試液10ml接種於雙料乳糖發酵培養基管3支，取1∶10、1∶100供試液各1ml接種於單料乳糖發酵管各3支，各管置36±1℃培養24h，如所有乳糖膽鹽發酵管都不產氣，則可報告大腸菌群陰性；如有產氣者，則按下列程序進行。②分離培養：將所有產氣發酵管分別劃線接種於EMB瓊脂平板上，置36±1℃培養18～24h，觀察菌落形態，並做革蘭氏染色和重發酵試驗。③挑取EMB平板上可疑大腸杆菌群落至少3～5個進行革蘭氏染色，同時分別接種於乳糖發酵管中。各管置36±1℃培養24～48h，觀察產氣情況。凡乳糖發酵管產氣、革蘭氏染色為陰性的無芽胞杆菌，可報告檢出大腸菌群。根據檢出的管數查表，可得大腸菌群的最大可能數。

3　檢驗結果（見表1）。

表1　樣品中大腸杆菌、大腸菌群檢測結果

（P＜0.01）

4　小結　60批共檢出大腸杆菌的有9批，大腸菌群檢驗陽性的有19批，檢出率各為31.7％與15.0％（P＜0.01），有極顯著性差異，其中9批大腸菌群檢出陽性，而大腸杆菌由於生化試驗結果不符合IMViC試驗，結果為－＋－＋。
　　大腸杆菌和大腸菌群同時檢出的有9批，檢出率為15.0％。
　　從以上試驗結果表明大腸杆菌檢驗不能真正代表藥品的衛生狀況，以大腸菌群檢驗作為口服藥品衛生標準的指示菌，將使藥品有更高的安全性。

參考文獻

1.鄭鈞鏞等：藥品微生物學及檢驗技術，人民衛生出版社，北京，1989；2∶282
2.藥品衛生檢驗方法：中華人民共和國衛生部，1990；12.21
3.李影林等：臨床微生物學及檢驗，吉林科學技術出版社，吉林，1991；9.1∶213
4.中華人民共和國藥典：1995年版附錄

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