摘 要：目的：建立紫丹活血片微生物限度檢查標準方法。方法：按《中國藥典》2005版的有關要求.通過接種代表性的陽性菌株，采用常規法、薄膜過濾法、稀釋法進行方法學驗證。結果：常規法對金黃色葡萄球菌、大腸杆菌、黑曲黴菌的回收率均高於70%，對枯草杆菌、白色念珠菌的回收率均低於70%。采用薄膜過濾法每筒衝洗400ml(分4次)，可以消除樣品對枯草杆菌、白色念珠菌的抗菌活性，使其正常生長；控製菌檢查采用稀釋法進行檢查。結論：本樣品可以采用薄膜過濾法及稀釋法進行測定。
關鍵詞：紫丹活血片；微生物限度檢查；常規法；薄膜過濾法；稀釋法；衝洗量；方法學驗證
中圖分類號：R927.1 文獻標識碼：A
文章編號：1007-2349(2007)12-0034-02
紫丹活血片具有活血化瘀，理氣止痛之功能.臨床用於氣滯血瘀所致胸痹(冠心病心絞痛)、眩暈(腦動脈硬化)。當建立藥品的微生物限度檢查法時，應進行方法的驗證，以證明所采用的方法適合於該藥品的細菌、黴菌及酵母菌數的測定及控製菌檢查。按《中國藥典》2005版的有關要求，通過接種代表性的陽性菌株，發現紫丹活血片具有抑菌活性，采用薄膜過濾法，可以消除紫丹活血片抑菌活性，確定了薄膜過濾法的最佳衝洗量和實驗條件，建立了微生物限度檢查方法。
1 儀器與材料
1.1儀器 HTY-Ⅲ型智能集菌儀，(杭州泰林醫療器械廠生產；開放式一次性薄膜過濾器，北京牛牛基因技術有限公司，批號：20051005)。
1.2樣品 紫丹活血片(雲南天利藥業有限公司生產，規格
1.3培養基 膽鹽乳糖增培養基(批號，05222)，玫瑰紅鈉瓊脂培養基(批號，030710)，營養瓊脂培養基(批號，050328)，改良馬丁瓊脂培養基(批號，010315)，營養肉湯培養基(批號，041010)，PH7.0氯化鈉一蛋白腖緩衝液(批號，050217)
1.4菌種 大腸埃希菌(Escherichia coli)[CMCC(F)44102]、枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)[CMCC(B)63 501]、金黃色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)[CMCC(B)26 003]、白色念珠菌(Candida albicans)[CMCC(F)98 001]、黑曲黴(Aspergillus niger)[CMCC(F)98 003](中國藥品生物製品檢定所提供)。
2 方法驗證
微生物限度檢查的驗證實驗按中國藥典2005版微生物限度檢查法(附錄ⅪJ)常規法和薄膜過濾法進行。
2.1菌液製備 取上述經
2.2菌液的檢驗 取上述金黃色葡萄球菌、枯草杆菌、大腸埃希菌10-5～10-7稀釋液各1ml，用
2.3供試液製備 取樣品
2.4回收率的測定
2.4.2細菌數薄膜過濾法測定 取1:10的供試液1ml，注入開放式濾器(先用少量緩衝液潤濕濾器)，用pH7.0無菌氯化鈉一蛋白腖緩衝液衝洗濾膜，每次100ml共4次(總衝洗
2.5回收率的計算 按如下公式計算試驗組的加菌回收率：回收率＝(試驗組一供試品對照組)÷菌液組×100%
2.6控製菌檢查方法的驗證
2.6.1常規法 取1:10供試液10ml加入100ml膽鹽乳糖培養基中，同時加入上述大腸埃希菌液1ml，置
2.6.2稀釋法 取1:10供試液10ml加入200ml膽鹽乳糖培養基中，同時加入上述大腸埃希菌液1ml，置
3 結果
從表2結果可以看出：該供試品接種5株陽性試驗菌株，常規法對枯草杆菌、白色念珠菌回收率均低於70%，對大腸埃希菌、金黃色葡萄球菌、黑曲黴菌回收率均高於70%；薄膜過濾法對枯草杆菌、白色念珠菌回收率均高於70%。說明該樣品具有抑菌活性，細菌數、黴菌數、酵母菌均需采用薄膜過濾法進行測定。見表3。
4 結論
從表2～3結果可以看出，通過接種5株陽性試驗菌株，經方法學驗證，細菌數、黴菌數、酵母菌均需采用薄膜過濾法進行測定；控製菌大腸埃希菌需采用稀釋法進行檢查。
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