器具及材料:
1、幹熱滅菌器:玻璃用具等之滅菌用,其內部中心溫度能達
該溫度1小時以上者。
2、高壓滅菌釜:培養基及稀釋液等不能幹熱滅菌之材料及用具等之滅菌用,
常以
3、培養皿:內徑
無氣泡,刮傷或其它缺點
4、吸管:通常使用者為10ml及1ml,應有0.1 ml之刻度。
5、培養箱:能維持內部溫差在±
6、水浴:能維持水溫溫差在±1.℃以內者。
7、薄膜過濾裝置:可放置薄膜過濾之漏鬥及真空固定支架基座,漏鬥應具無菌性
或可滅菌性。
8、濾膜孔徑0.45um化纖維過濾薄膜(水質檢驗用有格子,已滅菌)或同極品,
適用於薄膜過濾裝置者。
培養基:
1.KF鏈球菌洋菜培養基(KF Streptococcus agar)
蛋白(Proteose peptone)
酵母抽出物(Yeast extract)
氯化鈉(NaCl)
三偶氮鈉(Sodium azide NaN3)
甘油磷酸鈉(Sodiumglycerophosphate)
麥芽糖(Maltose)
乳糖(Lactose)
臭甲酚紫(Bromcresol purple)
洋菜(agar)
蒸餾水 1000ml
秤取各成分(或適量之商業製品)溶於蒸餾水或去離子水中,
加熱溶解洋菜,待完全溶解後,繼續加熱5分鍾,冷卻至
最後pH值為7.2士0.2,分裝於培養皿中。
2. 牛膽汁七葉靈洋菜培養基(Bile esculin agar)
牛肉抽出物(Beef extract)
蛋白(Peptone)
七葉靈(Esculin)
牛膽汁(Oxgall)
檸檬酸鐵(Ferric citrate)
洋菜(agar)
蒸餾水 1000ml
秤取各成分(或適量之商業製品)溶於蒸餾水中或去離子水中,
加熱至沸騰並使完全溶解後,於
分裝於培養皿中。
3.腦心浸出液(Brain-heart infusion,BHI)
牛腦浸出物(Calf brain infusion)
牛心浸出物(Beef heart infusion)
蛋白(Protepose Peptone)
葡萄糖(Dextrose)
氯化鈉(NaCl)
磷酸氫二鈉(Na2HPO4)
蒸餾水 1000ml
秤取各成分(或適量之商業製品)溶於蒸餾水或去離子水中,加熱使完全溶解後,分裝於試管中,於
試劑
1.30%過氧化氫試劑
2.革蘭氏染色液(Gram,s stain solution):
革蘭氏染色液組包括哈克氏結晶紫液(Hucker,s crystal violet),革蘭氏碘液,革蘭氏脫色劑及革蘭氏複染液(Safranin)
取樣:用以滅菌之容器或無菌袋盛取水樣品,取檢體量為100ml,若汙染情形嚴重時,則可采10ml每一檢體至少做二重複。
過濾:以減壓過濾方式,將檢體過濾之孔徑為0.45 um 濾膜上。
培養:經第2.4節過濾後之薄膜,取出放置在置有KF鏈球菌洋菜培養基之培養皿上,倒置,放入培養箱,在
計數:經培養後,觀察有否菌落生成,若有按紅或粉紅之菌落,是為典型菌落,挑選3至5個典型菌落進行確認試驗,照確認試驗所得之結果一確定之比例計算出糞便性鏈球菌之估計值,以CFU/100ml表示。