封閉式過濾器在藥物微生物限度檢查中的應用
錄入時間:2010-11-18 10:39:40
來源：CNKI
摘要:目的 介紹用封閉式過濾器(一次性) 進行控製菌檢查。方法 采用封閉式過濾器(一次性) 對含抑菌成分的3 種外用液體藥物進行控製菌檢查,並和藥典薄膜過濾法比較。結果 封閉式過濾器(一次性) 較藥典法簡單、易行。結論 可以采用,但還需要廠家改進。
關鍵詞:封閉式過濾器(一次性) ;藥物;微生物限度
2000 年版藥典在無菌檢查的薄膜過濾法中收載了使用封閉式薄膜過濾器的方法,使需要用薄膜過濾器的藥物(輸液、抗生素等) 的無菌實驗操作簡便易行,降低了出現假陽性的可能。在微生物限度的控製菌檢查中,當供試品含抑菌成分時,也可使用薄膜過濾法排除其抑菌作用,但2000 年版藥典尚未提及使用封閉式薄膜過濾器(一次性) ,本實驗采用封閉式過濾器對含抑菌成分的3 種外用液體藥物(聚維酮碘溶液,冰醋酸塗劑,水楊酸醇溶液) 進行控製菌檢查,並和藥典法比較,有方便易行,降低出現假陽性可能的優點。
1 儀器與材料
HTY- Ⅲ型智能集菌儀,封閉式薄膜過濾器(一次性)(杭州泰林醫療器械廠) ,M - 50 型玻璃過濾器(微孔濾膜0. 45μm) ;膽鹽乳糖增菌液(下稱BL) ,營養肉湯培養基,溴化十六烷基三甲銨瓊脂培養基,甘露醇高鹽瓊脂培養基(中國藥品生物製品檢定所) ;0. 9 %無菌氯化鈉溶液(下稱稀釋劑)(自製) ;金黃葡萄球菌[ CMCC(B) 2 6003 ] ,銅綠假單胞菌[CMCC(B) 10 104 ] (浙江省藥品檢驗所) ;聚維酮碘溶液(杭州潔康藥業有限公司,批號:010830 ,010904 ,010907) ,5 %水楊酸醇溶液(浙江大學邵逸夫醫院,批號: 020117 ,020119 ,020121) , 5 %冰醋酸塗劑( 浙江大學邵逸夫醫院, 批號:020118 ,020120 ,020122) 。
2 方法與結果
照《中國藥典》(2000 年版) 微生物限度檢查法(附錄XIJ ) 和《藥品衛生學檢驗方法》中的薄膜過濾法進行。
2. 1 供試液的製備
取樣品10mL ,加稀釋劑90mL ,搖勻,成1∶10 供試液備用。
2. 2 菌液的製備
取金黃葡萄球菌,銅綠假單胞菌的營養瓊脂培養物接種於營養肉湯培養基中,37 ℃培養18hr ,取該培養液1mL 用稀釋劑稀釋成每毫升含50～100 個的陽性對照菌液備用。
2. 3 薄膜過濾法
2. 3. 1 取一封閉式過濾器(三連) ,先夾住其中二管濾器的通道,將100mL 稀釋劑通過未夾住的另一管濾器,作陰性對照管。然後夾住這一管道,放開另二管的夾子。取供試液20mL ,置含稀釋劑200mL 的具塞鹽水瓶中,搖勻,通過未夾住的二管濾器。放開夾子,用稀釋劑衝洗濾器3 次,每次300mL (各管100mL) ,再將BL300mL 加至封閉式過濾器內(各管100mL) ,其中1 管中加銅綠假單胞菌陽性對照菌液。培養24h 再將上述培養液劃線接種於溴化十六烷基三甲銨瓊脂培養基平板上,培養24h ,觀察。
另取供試液20 mL ,同法, 隻將營養肉湯培養基代替BL ,甘露醇高鹽瓊脂培養基平板代替溴化十六烷基三甲銨瓊脂培養基平板,作金黃葡萄球菌控製菌的檢查。
2. 3. 2 用M - 50 型玻璃過濾器,取供試液40 mL ,置稀釋劑100 mL 中,搖勻,倒入裝配好消毒過的濾器內,減壓抽幹後用稀釋劑衝洗濾膜3 次,每次100mL ,取出濾膜剪成4 片,分置於BL 和營養肉湯培養基中作增菌培養(各有一份作陽性對照) ,24 h 後在相應平板上劃線,培養24h 後觀察。
3 討論
藥典的薄膜過濾法,實驗前需浸膜、裝配、高壓蒸汽滅菌,安裝濾膜的時候要注意濾膜與濾器密合,防止濾膜破損,漏液,準備工作較複雜。實驗中,需將濾膜剪成4 塊,無菌操作要求高,操作不當,有可能出現假陽性。如用一次性封閉式過濾器,則簡便易行,降低出現假陽性的可能,有明顯的優點。但成本相對較高。
現用於無菌檢查的一次性濾器有二連的,和三連的。微生物限度檢查中,若是口服製劑,三連的就很合適,增菌液隻BL 一種(三個分別為陰性對照管,樣品管和陽性對照管) ,取液置於Mug 管內培養,觀察。若是外用製劑,如本實驗取了兩個三連的,分別作兩種控製菌的檢查,但若有六連的,一起取樣,則更為方便。另外,在實驗中,接種棒無法直接蘸取劃板,本實驗中隻能用無菌針筒從連接管取樣,置於無菌試管中,再蘸取劃板。鑒於以上兩點,建議廠家適當改進,製成專門用於控製菌檢查的一次性濾器。
本實驗成功地采用封閉式過濾器(一次性) 對聚維酮碘溶液,5 %水楊酸醇溶液,5 %冰醋酸塗劑進行了控製菌檢查,和藥典所載方法比較後,認為該法適用於水溶性抑菌成分的中、西藥品的“滅活”處理,或連同其他方法對非水溶性藥物進行聯合“滅活”處理。
此封閉式過濾器(一次性) 在藥物微生物限度檢查中的應用雖然簡便,可以降低假陽性的發生率,但是該過濾器還不能滿足微生物限度檢查的要求,還需要進一步改進,而且成本高,所以該法可以嚐試,但目前不宜推廣。
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