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組織培養條件



錄入時間:2010-11-9 10:34:02 來源:360圖書館

一、實驗室

    組織培養是在無菌條件下進行,需要一定的實驗室條件,應具備:

(一)化學試驗室

用於存放各類化學藥品,配製培養基等。需要的物品有:

⒈藥品櫃 存放化學藥品。

⒉玻璃器皿櫃 存放各類玻璃器皿。

⒊試驗台 分別用來安放天平和配製培養基。

⒋冰箱 存放配好的母液和一些需低溫保存的藥品及植物材料等。

⒌其它 天平、水浴鍋、酸度計、水池等。

(二)洗滌消毒室

用作器皿的洗刷、消毒、幹燥等,配有高壓滅菌鍋、烘箱、鐵架、水池等,也可與化學實驗室合並。

(三)無菌操作室

用於植物材料的消毒、接種、轉移、原生質體製備等。要求室內封閉,保持無菌。並具備以下物品:

⒈超淨工作台 用於消毒、接種、轉移培養材料。

⒉紫外燈 用於空氣消毒。

⒊解剖鏡 用於胚胎培養、莖尖培養時剝取外植體。

⒋低速離心機 用於原生質體製備。

(四)培養室

是供培養物生長的場所,主要有培養架、控溫、控光設備等。培養架可分45層,上麵安裝3040W日光燈照明,每天照明1016小時左右,用自動定時器控製。溫度最好保持在1525左右。此外還可根據需要安置液體培養所需的搖床、轉床等。

二、常用藥品

組織培養所需藥品主要用於培養基的配製,也有部分用於消毒,主要有以下幾類:

(一)消毒藥品 

主要有次氯酸鈉、次氯酸鈣、雙氧水、漂白精片、溴水、硝酸銀等。

(二)無機鹽類 

  包括大量元素和微量元素兩類,主要的鹽類有KNO3MgSO4·7H2ONH4NO3KH2PO4CaCl2·2H2OFe2SO43Na2HPO4CuSO4NaNO3Na2SO4ZnSO4MnSO4·4H2OMnCl2·2H20KIH3BO3等,無機鹽是供外植體吸收的基本營養成分,各有不同作用,如NP影響蛋白質的合成,CaKSMg影響酶活性等。

(三)有機化合物 

    主要有蔗糖、維生素類、氨基酸等。其中蔗糖是不可缺少的碳源,也是滲透壓調節物質。維生素的主要作用是促進細胞分裂和誘導器官分化。氨基酸是蛋白質組成成分,也是有機氮源。

(四)植物生長調節劑 

    用於組織培養的主要有生長素、細胞分裂素及赤黴素三大類:

    ⒈生長素類 主要有吲哚乙酸(IAA)、萘乙酸(NAA)、24D和吲哚丁酸(IBA)。24D有利愈傷組織生長,NAAIAAIBA有利於器官分化。

    ⒉細胞分裂素類 主要有激動素(KT)、6-苄基腺嘌呤(BA)、玉米素(ZT)等。其作用是促進細胞分裂與分化,其中KT能明顯促進芽的分化而抑製根的形成。

    ⒊赤黴素 以GA3運用最廣泛,有促進不定芽和幼株伸長的作用。

(五)有機附加物 

    包括人工合成和天然的有機物,常用的有酵母提取物、椰乳、果汁等及相應的植物組織浸出液。對細胞和組織的增殖和分化有一定促進作用。此外瓊脂在組培中作為凝固劑,是外植體的支持體,常用濃度為0.51%。

(六)水 

    培養基用水原則上使用蒸餾水,去離子水等,尤其在對化學成分要求較精確的試驗中。但在組培苗的批量生產中,可選用自來水配製,以降低成本

 

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