組織培養是在無菌條件下進行,需要一定的實驗室條件,應具備:
(一)化學試驗室
用於存放各類化學藥品,配製培養基等。需要的物品有:
⒈藥品櫃 存放化學藥品。
⒉玻璃器皿櫃 存放各類玻璃器皿。
⒊試驗台 分別用來安放天平和配製培養基。
⒋冰箱 存放配好的母液和一些需低溫保存的藥品及植物材料等。
⒌其它 天平、水浴鍋、酸度計、水池等。
(二)洗滌消毒室
用作器皿的洗刷、消毒、幹燥等,配有高壓滅菌鍋、烘箱、鐵架、水池等,也可與化學實驗室合並。
(三)無菌操作室
用於植物材料的消毒、接種、轉移、原生質體製備等。要求室內封閉,保持無菌。並具備以下物品:
⒈超淨工作台 用於消毒、接種、轉移培養材料。
⒉紫外燈 用於空氣消毒。
⒊解剖鏡 用於胚胎培養、莖尖培養時剝取外植體。
⒋低速離心機 用於原生質體製備。
(四)培養室
是供培養物生長的場所,主要有培養架、控溫、控光設備等。培養架可分4-5層,上麵安裝30-40W日光燈照明,每天照明10-16小時左右,用自動定時器控製。溫度最好保持在15-
二、常用藥品
組織培養所需藥品主要用於培養基的配製,也有部分用於消毒,主要有以下幾類:
(一)消毒藥品
主要有次氯酸鈉、次氯酸鈣、雙氧水、漂白精片、溴水、硝酸銀等。
(二)無機鹽類
包括大量元素和微量元素兩類,主要的鹽類有KNO3、MgSO4·7H2O、NH4NO3、KH2PO4、CaCl2·2H2O、Fe2(SO4)3、Na2HPO4、CuSO4、NaNO3、Na2SO4、ZnSO4、MnSO4·4H2O、MnCl2·2H20、KI、H3BO3等,無機鹽是供外植體吸收的基本營養成分,各有不同作用,如N、P影響蛋白質的合成,Ca、K、S、Mg影響酶活性等。
(三)有機化合物
主要有蔗糖、維生素類、氨基酸等。其中蔗糖是不可缺少的碳源,也是滲透壓調節物質。維生素的主要作用是促進細胞分裂和誘導器官分化。氨基酸是蛋白質組成成分,也是有機氮源。
(四)植物生長調節劑
用於組織培養的主要有生長素、細胞分裂素及赤黴素三大類:
⒈生長素類 主要有吲哚乙酸(IAA)、萘乙酸(NAA)、2,4-D和吲哚丁酸(IBA)。2,4-D有利愈傷組織生長,NAA、IAA、IBA有利於器官分化。
⒉細胞分裂素類 主要有激動素(KT)、6-苄基腺嘌呤(BA)、玉米素(ZT)等。其作用是促進細胞分裂與分化,其中KT能明顯促進芽的分化而抑製根的形成。
⒊赤黴素 以GA3運用最廣泛,有促進不定芽和幼株伸長的作用。
(五)有機附加物
包括人工合成和天然的有機物,常用的有酵母提取物、椰乳、果汁等及相應的植物組織浸出液。對細胞和組織的增殖和分化有一定促進作用。此外瓊脂在組培中作為凝固劑,是外植體的支持體,常用濃度為0.5-1%。
(六)水
培養基用水原則上使用蒸餾水,去離子水等,尤其在對化學成分要求較精確的試驗中。但在組培苗的批量生產中,可選用自來水配製,以降低成本
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