大腸菌群是影響飲用水安全的主要因素之一,其檢測方法的使用非常重要。為了方便用戶對檢測方法的選用本文將傳統的LB-BGLB培養基法(簡稱LB法)、MMO-MUG法(簡稱MMO法)、XGAL-MUG法(簡稱XGAL法)進行了比較。LB法和MMO法都是已被官方采用的方法;XGAL法是采用安科生物製品 (上海)有限公司開發的一種顯色培養基進行檢測的方法。這三種檢測方法均適用於桶裝飲用水中大腸菌群的檢測。
XGAL法、MMO法與LB法原理
MMO法檢測原理 培養基ONPG被大腸菌群中的β-半乳糖苷酶分解產生鄰硝基苯酚後會呈現黃色,所以,若呈現黃色.則表明含有大腸菌群;另外,MUG可被大腸杆菌裏的特殊酶-β-葡萄糖醛酸酶分解若用366nm的紫外線燈照射顯熒光則表明含有大腸杆菌。
LB法檢測原理 根據上水試驗法. 以LB培養基、LB-BGLB培養基、EMB培養基、標準瓊脂培養基做推定試驗、確定試驗完全試驗。
XGAL法檢測原理 根據培養基中增殖底物及酶底物X-GAL被β-半乳糖苷酶分解產生遊離吲哚後呈現藍色,判斷是否含有大腸菌群:而MUG也可被β-半乳糖苷酶分解經紫外線照射若出現青紫色熒光,則含有大腸杆菌。
XGAL法、MMO法與LB法靈敏度比較試驗
試驗菌株:E.coli一株,Klebsiella pneumoniae株,Enterobacter cloacae 兩株.Citrobacter freundii 一株;培養時間:LB法按照上水試驗方法,XGAL法和MMO法為24小時;判斷基準:遵循上水試驗方法或按照使用說明書操作。試驗結果見表1。
表1 靈敏度比較實驗(S推定試驗陽性,K確定試驗陽性)
菌種 |
稀釋倍數與方法 | |||||||||||
10-8 |
10-9 |
10-10 |
10-11 | |||||||||
LB |
XGAL |
MMO |
LB |
XGAL |
MMO |
LB |
XGAL |
MMO |
LB |
XGAL |
MMO | |
E.coli |
+ |
+ |
+ |
+ |
+ |
+ |
- |
+ |
- |
- |
- |
- |
K. pneumoniae |
+ |
+ |
+ |
+ |
+ |
+ |
- |
- |
- |
- |
- |
- |
E. cloacae |
K |
+ |
+ |
K |
+ |
+ |
K |
+ |
- |
- |
- |
- |
E. cloacae |
K |
+ |
+ |
K |
+ |
+ |
- |
+ |
+ |
- |
- |
- |
C. freundii |
S |
+ |
+ |
S |
+ |
+ |
S |
- |
- |
- |
- |
- |
由表1可以看出E.coli和Kpneumoniae在LB法、XGAL法、MMO法上結果非常一致;E.cloacae和C.freundii在LB法裏顯示的是確定陽性或推定陽性,MMO法裏顯示,在10-8—10-9範圍內都是陽性。
XGAL法、MMO法與LB法兩兩比較試驗
LB與MMO法的比較
陽性一致數為76個陰性一致數為195個,合計一致率為88.9%.不一致數為34個,不一致率為11.1%。MMO法呈陽性.而LB法呈陰性的為25個;LB法推定試驗呈陰性的為3個,確定試驗階段呈陰性的為7個,完全試驗階段呈陰性的有15個;MMO法呈陰性,LB法呈陽性的有9個.
LB法和XGAL法的比較 陽性一致數為79個陰性一致數為193個.合計一致率為89.2%不一致數是33個.不一致率為10.8%。XGAL法呈陽性,LB法呈陰性為27個;LB法的推定試驗呈陰性的為7個,確定試驗階段呈陰性的為5個,完全試驗階段呈陰性的為15個;XGAL法呈陰性,LB法呈顯陽性的有6個。
MMO法和XGAL法的比較 MMO法和XGAL法的陽性一致數為96個陰性一致數為194個合計一致率為95.1%。與LB法相比,一致率較高。
通過試驗發現MMO法和XGAL法檢測結果非常接近XGAL法可以在應急情況下使用或作為MMO法的輔助方法,並且兩者靈敏度都比LB法高。由於XGAL培養基中的十二烷基硫酸鈉具有阻止革蘭氏陽性菌發育的作用.所以XGAL法對微生物的選擇性比MMO法更強;XGAL法相對穩定.幾乎沒限陽性反應;XGAL法的培養基經滅菌、注入簡易容器操作簡單.可大大減少實驗人員準備滅菌試管的步驟。
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