SS 瓊脂的質量控製及測試技術

SS瓊脂不僅可對接種標本同時分離沙門菌和誌賀菌，而且對大腸杆菌及其它非腸道致病菌有較強的抑製作用，因而，仍然是目前應用最廣泛的一種選擇性腸道菌培養基。但由於配製培養基所用原材料( 蛋白腖、膽鹽等)的質量及其標準化問題尚未得到全麵解決，如僅按國家標準提供的配方投料生產或配製，培養基的質量往往達不到要求。為此，無論是實驗室自製SS瓊脂，還是從培養基生產廠家直接購買商品化的幹燥培養基，在使用之前都必需作適當的質量鑒定，以確保實驗室的工作質量。關於SS瓊脂的質量控製項目，因實驗室條件及用於常規工作還是實驗研究等性質不同而有所選擇。現將我們在工作實踐中選擇應用的質量控製項目及有關測試技術介紹如下： 

1  SS瓊脂質量鑒定綜合參考指標

SS瓊脂的質量綜合參考指標為：

①加熱溶解後不得有肉眼可見不溶物存在，培養基傾注平皿凝固後應看清五號字體；

②凝固後SS瓊脂用接種環劃線應不破裂；

③pH值7.0±0.2 ；

④誌賀菌生長率大於 40％，菌落呈無色透明，直徑不小於1.5mm；

⑤沙門菌生長率大於70％，菌落呈無色透明或帶黑心(硫化氫陽性菌株)，直徑不小於 1.8mm；

⑥大腸杆菌菌落呈桃紅色(或有紅色中心)，不透明。對大腸杆菌的抑製率應大於85％；

⑦金黃色葡萄球菌被抑製。

2  SS瓊脂質量控製指標的測試

2.1  感官指標的測試   按規定比例將稱取定量的SS瓊脂粉(或自製SS瓊脂的各成份， 以下同) 加入 pH 6.4～7.0之間的蒸餾水攪拌均勻加熱溶解後，對光觀察透明度及不溶物；將瓊脂傾注平皿，凝固後置於五號字體上觀察字體筆劃是否清晰並對光觀察平皿色澤，用接種環在表麵劃線觀察是否破裂。

2.2  pH值測定    將SS瓊脂粉按比例加入 pH 7.0的蒸餾水，在室溫下充分攪拌均勻，使除瓊脂及檸檬酸鐵以外的成份全部溶解，放置10min 取上清液用酸度計測定其pH值。 

2.3 腸道致病菌生長率測定  分別取鼠傷寒沙門菌(50013 )、副傷寒沙門菌(50073 )、宋內氏誌賀菌(51334 )、福氏誌賀菌(51302 )、大腸杆菌( ATCC25922 )、金黃色葡萄球菌(ATCC25923 )的6h肉湯培養物，以生理鹽水稀釋至相當於0.5號麥氏比濁管濃度，再稀釋至含菌量為1000cfu/ml左右。取此菌液0.1 ml，用L棒均勻塗布於待測試SS平皿和對照試驗的營養瓊脂平皿上(每份5個平皿)，置36℃培養24h，計數菌落數並計算細菌生長率。

細菌生長率=試驗平皿內的平均菌落數/對照平皿內的平均菌落數×100％  

2.4 抑菌試驗

2.4.1  大腸杆菌抑製率試驗   除大腸杆菌取代腸道致病菌外，其餘操作與2.3相同。

抑菌率=1-（試驗平皿內的平均菌落數/對照平皿內的平均菌落數×100％ ）

2.4.2金黃色葡萄球菌抑製試驗  挑取金黃色葡萄球菌的6h肉湯培養物1環，劃線接種於待測SS瓊脂置36℃培養24h，觀察有無金黃色葡萄球菌生長。

2.5 菌落色澤觀察及直徑測定    將試驗菌株( 鼠傷寒沙門菌、副傷寒沙門菌、宋內氏誌賀菌、福氏誌賀菌、大腸杆菌) 劃線接種於待測SS瓊脂，置36℃，24h培養後，以肉眼對光觀察菌落色澤，用測微尺法測量單個菌落區的具有代表性的5個單個菌落直徑，取其平均值。

簡易的測微尺測量菌落直徑的方法為：將裝有測微尺的顯微鏡10×目鏡置於解剖鏡目鏡筒中，以油標卡尺置於解剖鏡載物台，調節視野至刻度清晰，使目鏡測微尺與卡尺分格相平行重疊記錄卡尺lmm相當於測微尺的格數，移去尺，將待測菌落平皿置於視野中，使測微尺通過菌落直徑，量取被測菌落直徑所占測微尺的格數。

菌落直徑( mm ) = 被測菌落直徑所占測微尺的格數/卡尺 l mm相當於測微尺的格數

3 討論

3.1  SS瓊脂幹粉的保質期通常為2年，由於瓊脂粉的保質期也是2年，因此，如果培養基廠家生產SS瓊脂培養基所用的是即將到期的瓊脂，則該SS瓊脂粉的保質期將必然受到影響，尤其是凝膠強度指標。如果SS瓊脂粉的水分含量高( >6％) 或包裝不密閉，其保質期將更加無法得到保證。

3.2  SS瓊脂加熱溶解後，宜全部傾注平皿，因為反複加熱溶解不僅使水份過多揮發，而且會使SS瓊脂的質量受到影響，對於當天未用完的SS平皿，可用塑料袋包紮後置於4～10℃冰箱內貯存7天以上，不影響對腸道致病菌的分離效果。

3.3 製備SS瓊脂用水的質量要求，有關文獻的記載並不一致，在實際工作中蒸餾水、純淨水均有使用。作者認為，pH6.4～7.0之間的蒸餾水、純淨水均可使用。pH過高或過低，特別是某些“ 純淨水” 的pH值可低至5.5以下等均不宜用於製備SS瓊脂。 

3.4 硫化氫陽性菌株在 SS瓊脂上的反應遠不及WS、HE瓊脂等。主要表現在H₂S陽性菌株菌落黑色中心出現遲緩及黑色中心區域較小。據報道目前國內市售的商品化SS瓊脂在24h內出現H₂S陽性者為50％，其餘50％需36h後出現。因此，在不影響SS瓊脂對腸道致病菌分離效果的前提下，適當調正配方，使H₂S陽性菌株在24h內出現陽性，對絕大多數沙門菌的分離具有一定的實用價值。 

3.5 腸道菌的菌落直徑已成為考核SS瓊脂的公認的質量指標之一。某些培養基生產廠家的SS瓊脂上誌賀菌菌落直徑達5mm以上，大腸杆菌菌落直徑達3.2mm以上，對腸道菌幾乎沒有任何抑製性，這種SS瓊指的選擇性極差。作者認為，沙門菌、誌賀菌的菌落直徑能達到1.2mm以上即可，單純的過於追求菌落直徑，並無實際意義，而應當將腸道致病菌的生長率及對大腸杆菌的抑製率作為主要考核指標。

3.6大腸杆菌菌落在SS瓊脂上的膽汁酸沉澱問題，已引起培養基生產廠家及檢驗界人士的普遍關注，單個大腸菌菌落出現膽汁酸沉澱，將影響對腸道致病菌的檢出效果，可采取提高 SS瓊脂中所用原料膽鹽的質量或使用混合膽鹽來解決這一問題。 

3.7 有關文獻對 SS瓊脂上腸道致病菌的菌落色澤的描述很不統一。具體有：無色透明菌落、 灰白色菌落、無色半透明菌落、透明微黃色菌落等。由於菌落色澤與培養基的成份、培養時間、觀察條件等均有一定關係，因此，對有關菌落的色澤及透明度，沒有必要過於強調某一具體描述的要求。 

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