MS培養基配製中的五點注意

1 母液配製必須嚴格分類

配製高濃度的母液是植物組織培養的基本功。配製母液的目的，除了多次取用、節省實驗準備的時間外，還有抑製雜菌生長的作用。高濃度的母液能夠有效地抑製細菌與黴菌的生長，加上低溫環境 ( 4℃) ，能夠大大增加培養基的存放時間( 一年左右 ) 。一般而言，培養基中的各個成分可以按照表1的分類方式配成母液。 

表 1

注：“ 母液倍數”為筆者建議 ，具體濃度應以具體用量為準。 

按照表 1的要求，每一個“分類別”為一瓶母液，按照相應的成分配製好後，4℃避光保存，用時按照母液倍數進行稀釋即可。

母液分類的依據，是要避免MS培養基中某些成分發生沉澱反應。例如，如果將全部的大量元素混合在一起配製， 則KH₂PO₄和CaCl₂ 易產生Ca₃( PO₄)₂沉澱，而CaC1₂和 MgSO₄ 將生成CaSO₄ 沉澱。 

除上述成分外，還必須加上蔗糖、瓊脂以及激素，才構成用於組織培養的MS培養基。 

2 激素的溶解方法

MS培養基中常用的激素，如2,4 - D、NAA、6-BA，也要配製成 10～20倍母液，這樣便於稱量(激素的用量極小，給稱量造成不便)，且可以多次取用。激素的配製與一般的藥品不同，需要助溶劑。

如要配製 10 mL的 1mg／mL 2，4- D母液，則應稱取0.01g 2，4 - D固體，置於小燒杯中， 再以 1～3 mL的95％乙醇(或 0.1 mo l／L NaOH) 溶解，最後緩慢加入蒸餾水定容。即每加入1 mL蒸餾水，立即攪拌均勻，使白色沉澱消失。重複數次，直至定容 。

一般而言，生長素類物質2,4-D、 N AA) 要用95％乙醇(或0.1 mo l／L NaOH)助溶，而細胞分裂素類物質(如6-BA)要用0.1 mo l／L的HC1助溶。助溶劑的用量一定要小，不能因其溶解效果好而過量使用，否則將影響培養基的質量(改變培養基成分或 pH值) 。配製好的激素要常溫避光保存，盡快使用(盡量不超過一個月)。將激素母液保存在 4 ℃冰箱中， 希望獲得較長的保存時間。但事實上這種做法是不可取的，因為激素在低溫環境中易析出沉澱，影響使用效果。                                                   

3 危險藥品的使用與保管

盡管組織培養技術已經相當成熟，也很普及，但該技術並不安全。除注意滅菌鍋、超淨台等大型儀器的使用安全外 ，最重要的當屬危險藥品的使用與保管。原則上，MS培養基中任何一種藥品都有一定的危險性。現隻把最突出、最需要預防的藥品注釋如下。

( 1 ) NH₄NO₃、 KNO₃ 

此兩種藥品為易爆品，取用時一定要輕拿輕放，保存在陰涼處。另外，目前NH4NO3，的購買受到一定的限製，也可以考慮使用其他培養基，如N₆或B₅培養基，無 NH₄ NO₃成分，亦為組織培養所常用。

(2) EDTA- Na₂ 、CoC1₂、 2，4-D 此三種藥品為致癌物，配製時要帶膠皮手套，或兩層塑料手套。EDTA-Na為金屬螯合劑，有一定的粘性；CoCl₂能夠導致基因突變，遺傳學實 驗中也常用其作為致突變劑；2，4 - D是高效農藥，對人的皮膚有傷害作用。

4 熱水定容原則

在母液、激素、蔗糖、瓊脂都加入後，很多人習慣用微波爐或電磁爐加熱溶解培養基(特別是瓊脂) 。培養基熔化後，由於水分的蒸發，會造成體積的減少，從而需要定容。這時一定要用熱水(60℃左右) 進行定容，切忌用冷水(30℃以下)，否則培養基中局部的瓊脂將凝 固，造成營養成分濃度不均。 

5 關於調節 p H

適合的p H保證了營養成分的正常發揮，也決定了培養基的硬度(偏酸則過軟，偏堿則過硬，都不利於組織的生長) ，故要十分留意。對於MS 培養基而言，隻要各個成分按照用量精確加入，並且在熔化培養基時加熱時間適合( 平均100 mL培養基加熱60～90s ， 保證完全熔化的同時，盡量限製加熱時間) ，則培養基的pH自然地將處於最適範圍內。調解 pH時最好用電子pH計，以保證精確度。pH試紙的誤差較大，要小心調節。可以將pH調到比最適值小一些，因為培養基在滅菌後，p H將變大。 

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