本文規定了食品中大腸菌群、糞大腸菌群和大腸杆菌檢驗方法。
本文適用於航空食品的檢驗。
2 設備和材料
吸管(1ml、10ml)、恒溫培養箱(36±
3 培養基和試劑
月桂基硫酸鹽胰蛋白月示(LST)肉湯、煌綠乳糖膽鹽(BGLB)肉湯、EC肉湯、伊紅美藍瓊脂(EMB)、營養瓊脂斜麵、色氨酸肉湯、MR-PV培養基、Korser氏枸掾酸鹽肉湯、結晶紫中性紅膽鹽瓊脂(VRBA)、Butterfield氏磷酸鹽緩衝稀釋液、生理鹽水、革蘭氏染色液、Kovacs氏靛基質試劑、甲基紅指示劑、Voges-proskauer(V-P)試劑、
4 樣品製備
4.1 以無菌操作取有代表性的樣品盛於滅菌容器內。如有包裝,則用75%乙醇在包裝開口處擦拭後取樣。
4.2 製備樣品勻液
以無菌操作取
4.3 稀釋樣品勻液
用10ml滅菌吸管準確吸取1:10的樣品勻液10ml,放入裝有90ml稀釋劑的150ml稀釋瓶中。迅速振搖,將樣品混勻,製成1:100的樣品勻液。
5 大腸菌群的測定
5.1 大腸菌群MPN值的測定
5.2 大腸菌群的證實試驗
6 糞大腸菌群測定
6.1 用接種環將所有48±2h內產氣的LST肉湯管培養物移種於EC肉湯管中。
6.2 將所有接種的EC肉湯管在30min內放入44.5±
6.3 記錄EC肉湯管的產氣情況。產氣管為糞大腸菌群試驗陽性;不產氣管為糞大腸菌群試驗陰性。
6.4 結果報告:按產氣管數,查MPN表報告每克(毫升)樣品中糞大腸菌群的MPN值。
7 大腸杆菌測定
7.1 將6.3條中的EC肉湯管繼續培養24h取其產氣管的培養物劃線接種於伊紅美藍(EMB)平板,36±
7.2 檢查平板上有無具黑色中心有光澤或無光澤的典型菌落。
7.3 如有典型菌落,則從每個平板上至少挑取2個典型菌落;如無典型菌落,則從每個平板上至少挑取2個可疑菌落。用接種針接觸菌落中心部位,移種到營養瓊脂斜麵上,36±
7.4 將斜麵培養物移種到下列培養基進行生化試驗。
將 MR-VP培養物的剩餘部分再培養48h滴加5滴甲基紅溶液。如培養物變紅色,為甲基紅試驗陽性,若變黃色則為陰性反應。
靛基質 |
MR |
VP |
枸櫞酸 |
鑒定(型別) |
+ |
+ |
- |
- |
典型大腸杆菌 |
- |
+ |
- |
- |
非典型大腸杆菌 |
+ |
+ |
- |
+ |
典型中間型 |
- |
+ |
- |
+ |
非典型中間型 |
- |
- |
+ |
+ |
典型產氣腸杆菌 |
+ |
- |
+ |
+ |
非典型產氣腸杆菌 |
7.5 結果報告:大腸杆菌為革蘭氏陰性無芽孢杆菌,發酵乳糖產酸產氣,IMViC試驗為++--或-+--,再根據LST肉湯陽性管數查MPN表,報告每克(毫升)樣品中大腸杆菌MPN值。
注:本文參照SN0169-92《出口食品中大腸菌群、糞大腸菌群和大腸杆菌檢驗方法》
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