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微生物技術資料
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噬菌體的鑒定



錄入時間:2010-10-28 10:37:11 來源:生命經緯

1 樣品采集

將一定的樣品放入滅菌三角瓶中,加入對數生長期的敏感指示菌如大腸杆菌菌液35mL,再加20mL二倍肉湯蛋白腖培養液。

2 增殖培養

30振蕩培養1218h, 使噬菌體增殖。

3 離心分離

將上述培養液以3000rpm離心1520min, 取上清液,用pH7.01%蛋白腖水稀釋至10-210-3,用於噬菌體檢查及效價測定。

4 生物測定法

4.1雙層瓊脂平板法

4.1.1 倒下層瓊脂  融化下層培養基,倒平板(約10mL/皿)待用。

4.1.2倒上層瓊脂

融化上層培養基,待融化的上層培養基冷卻至50左右時,每管中加入敏感指示菌 (大腸杆菌) 菌液0.2mL,待檢樣品液或上述噬菌體增殖液0.20.5mL,混合後立即倒入上層平板鋪平。

4.1.3恒溫培養  30恒溫培養612h觀察結果。

4.1.4 觀察結果  如有噬菌體,則在雙層培養基的上層出現透亮無菌圓形空斑──噬菌斑。

4.2 單層瓊脂平板法

省略下層培養基,將上層培養基的瓊脂量增加至2%,融化後冷卻至45左右,如同上法加入指示菌和檢樣,混合後迅速倒平板。30恒溫培養616h後觀察結果。

4.3離心分離加熱法(快速檢查)

取大腸杆菌正常培養液和侵染有噬菌體的異常大腸杆菌培養液,4000rpm離心20min,分別取兩組發酵液的上清液(A1),一部分於721分光光度計上測定OD650光密度值,另外各取5mL上清液於試管中,置水浴中煮沸2minA2),檢測A2溶液OD650光密度值,記錄結果。

 

 

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