支原體培養技術

培養基：牛心湯複合培養基等。分離培養：無菌采取肺、肝、脾、腎組織，直接剪成小塊放在固體培養基上劃一直線，再用無菌鉑耳環在與其垂直方向劃線，或者將組織塊剪碎磨成勻槳，經液體培養基連續係列稀釋後培養．若當液體材料為牛乳、排泄物、胎液等，可直接取0.2ML接種於液體培養基或取0.1ML接種於固體培養基。固體瓊脂平板置37攝氏度潮濕需氧條件或在５％二氧化碳下培養48-96h,用斜射光或放大25-40倍的立體顯微鏡檢查,若有特異菌落出現,應選取散在的單個菌落用無菌解剖刀切下小瓊脂塊,用巴氏吸管小心地將菌落和周圍瓊脂吸入,再將其移入盛有2-3ML的液體肉湯培養管培養48h,將其培養物通過0.45微升孔徑大小的濾膜過濾後作1:10和1:100稀釋,每一個稀釋液取0.05ML塗布於幾個瓊脂平板,即可得到純的支原體培養物。

牛心湯複合培養基：
　　牛心湯1000ml
　　蛋白腖10g
　　氯化鈉5ml
　　酵母提取液10ml
　　無菌馬血清200ml
　　1.25%醋酸鉈溶液20ml
　　青黴素200IU/ml

實驗 支MP 肺炎支原體培養實驗

一、標本采集

支原體常侵及人和動物的粘膜表麵，一般可用棉花拭子塗抹取樣後放入2~3ml支原體液體培養基的小管中，或取其分泌液，若標本是組織塊，可在滅菌乳缽或玻璃勻漿後接種，取樣後應盡快接種培養。

二、分離培養

1、支原體固體培養基接種法 轉動拭子將標本液體盡量擠出，用無菌滴管吸1~2滴接種在平皿上蓋好，用L棒塗抹或傾斜轉動平皿使標本均勻分布，置37℃孵育。

2、支原體半固體培養基接種法 混種法：在製備半固體培養基時，培養基加熱溶化，溫度降至50℃時，添加動物血清、酵母浸液及青黴素後混勻，待冷卻至37~40℃時，用無菌滴管吸取標本0.5~1ml加入培養基中，充分混勻，凝固後置37℃孵育。

3、穿刺接種法：方法同細菌接種法。

三、結果觀察
　　絕大多數支原體為兼性厭氧，少數在含10% CO₂和相對濕度80~90%的大氣環境中生長良好。支原體生長緩慢，多數於3~4d長出菌落，少數於1~2w方長出典型菌落，在平皿固體培養基上生長的菌落呈"油煎蛋"狀，邊緣不整齊。

四、附錄
　　糖酵解培養基（肺炎支原體培養基）
　　基礎培養基 70ml
　　馬（或牛血清） 20ml
　　25%酵母浸液 10ml
　　0.4%酚紅 0.5ml
　　1%醋酸鉈 2.5ml
　　青黴素10000IU/ml 5.0ml
　　調pH 7.8
　　肺炎支原體培養很簡單的，特別是液體培養，不需要防護！
　　配方上麵的有點複雜而模糊，簡單：
　　PPLO 21g（商品化買）
　　酵母粉 6g
　　馬血清 200ml（沒有的話用小牛血清代替）
　　L－半胱氨酸 0.3g
　　葡萄糖 10g
　　1%酚紅 4ml
　　AMP 若幹（0.1－0.2g，多加點不影響）
　　有時還加SMZ和TMP！
　　ph要調的，大概在7.5－7.6之間吧！
　　酚紅可以高壓的！

上一篇：支原體和脲原體

下一篇：支原體汙染的特點及檢驗