植物組培中花藥的培養方法

①材料的選擇與處理

a、花粉發育時期。

選擇合適的花粉發育時期，是提高花粉植株誘導成功率的重要因素。被子植物的花粉發育可分為四分體期、單核期（小孢子期）、二核期和三核期（雄配子期）4個時期。單核期和二核期又可分為前、中、晚期。對大多數植物來說，花粉發育的適宜時期是單核期，尤其是單核中、晚期。此時，單核晚期花粉中形成的大液泡已將核擠向一側，又叫單核靠邊期。

b、花粉發育時期的檢測。

一般將植物的花藥置於載玻片上壓碎，加1-2滴醋酸洋紅染色，再進行鏡檢，以確定花粉發育時期。水稻等植物的花粉，處於單核期時尚未積累澱粉，在進入三核期後的花粉開始積累澱粉，因此可用碘-碘化鉀染色鑒定。

此外，花粉發育時期與花蕾或幼穗大小、顏色等特征之間有一定的對應關係，可供田間采樣時參照。如白菜單核期的花蕾為0.3-0.4cm，茄子單核靠邊期的花蕾為1.2-1.5cm。

c、材料預處理。

將采集的花蕾或花序進行適當的處理能提高花粉植株誘導頻率。主要處理方法有低溫、離心、低劑量輻射、化學試劑（如乙烯利）處理等。其中低溫處理是最常用的方法，將禾穀類植物帶葉鞘的穗子或其他植物的花蕾用濕紗布包裹放入塑料袋中，置冰箱冷藏。例如煙草在7-9℃放置7-14d，小麥、大麥在7℃放置7-14d，水稻在10℃放置14-21d可大幅度提高誘導率。

②表麵消毒

花藥培養時，一般消毒程序比較簡便。由於花蕾未開放時，花藥處於無菌狀態，常以70%酒精棉球擦試材料外表或浸潤片刻即可。也可用0.1%升汞浸泡3-5min，或漂白粉溶液浸5-10min，最後用無菌水衝洗材料3-5次備用。

③接種

在超淨工作台上用鑷子剝去部分花冠，露出花藥，夾住花絲，取出花藥接種到培養基上。注意不要直接夾花藥，以免損傷。接種密度宜高，以促進“集體效應”的發揮，有利於提高誘導率。對於花器很小的植物，可能需要借助解剖鏡夾取花藥。

④培養

將培養材料置於25-28℃，光照強度2000-10000lx，光照時間12-18h/d。

⑤植株形態發生

花粉植株的形成有兩條途徑：一是花藥中的花粉形成愈傷組織，愈傷組織經再分化誘導成苗；二是花粉分化成胚狀體而直接成苗。