土壤中分解尿素的細菌的分離與計數
1 篩選菌株w.w.w.k.s.5.u.c.o.m
（1）實驗室中微生物的篩選應用的原理
人為提供有利於目的菌株生長的條件（包括營養、溫度、pH等），同時抑製或阻止其他微生物生長。
（2）選擇性培養基
在微生物學中，將允許特定種類的微生物生長，同時抑製或阻止其他種類微生物生長的培養基，稱作選擇培養基。
（3）配製選擇培養基的依據
根據選擇培養的菌種的生理代謝特點加入某種物質以達到選擇的目的。例如，培養基中不加入有機物可以選擇培養自養微生物；培養基中不加入氮元素，可以選擇培養能固氮的微生物；加入高濃度的食鹽可選擇培養金黃色葡萄球菌等。
2 統計菌落數目
（1）測定微生物數量的常用方法有稀釋塗布平板法和顯微鏡直接計數。
（2）稀釋塗布平板法統計樣品中活菌的數目的原理
當樣品的稀釋度足夠高時，培養基表麵生長的一個菌落，來源於樣品稀釋液中的一個活菌。通過統計平板上的菌落數，就能推測出樣品中大約含有多少活細菌。為了保證結果準確，一般設置3～5個平板，選擇菌落數在30～300的平板進行計數，並取平均值。統計的菌落數往往比活菌的實際數目低，因此，統計結果一般用菌落數而不是活菌數來表示。
3 設置對照
設置對照的主要目的是排除實驗組中非測試因素對實驗結果的影響，提高實驗結果的可信度。
4 實驗設計
實驗設計包括實驗方案，所需儀器、材料、用具和藥品，具體的實施步驟以及時間安排等的綜合考慮和安排。
（1）土壤取樣
從富含有機物、潮濕、pH≈7的土壤中取樣。鏟去表層土，在距地表約3～8cm的土壤層取樣。
（2）製備培養基
準備牛肉膏蛋白腖培養基和選擇培養基。牛肉膏蛋白腖培養基作為對照，用來判斷選擇培養基是否起到了選擇作用。
（3）微生物的培養與觀察
將土樣以1、101、102……依次等比稀釋至107稀釋度，按照濃度從低到高的順序塗布平板，不必更換移液管。注明培養基種類、培養日期以及平板培養樣品的稀釋度。將塗布好的培養皿放在
（4）細菌的計數
當菌落數目穩定時，進行計數，防止因培養時間不足而導致遺漏菌落的數目。求出平均值，根據平板所對應的稀釋度計算出樣品中細菌的數目。
5 實驗案例
土壤中某樣品細菌的分離與計數
實驗的具體操作步驟如下。
1.土壤取樣
從肥沃、濕潤的土壤中取樣。先鏟去表層土
2.製備培養基
準備牛肉膏蛋白腖培養基和選擇培養基將菌液稀釋相同的倍數，在牛肉膏蛋白腖培養基上生長的菌落數目應明顯多於選擇培養基上的數目，因此，牛肉膏蛋白腖培養基可以作為對照，用來判斷選擇培養基是否起到了選擇作用。由於初次實驗，對於稀釋的範圍沒有把握，因此選擇了一個較為寬泛的範圍：稀釋倍數為103～107。每個稀釋度下需要3個選擇培養基，1個牛肉膏蛋白腖培養基，因此共需要15個選擇培養基，5個牛肉膏蛋白腖培養基。此外，還需要準備8個滅菌的試管和1個滅菌的移液管。
3.微生物的培養與觀察
將
將塗布好的培養皿放在
挑選選擇培養基中不同形態的菌落接入含酚紅培養基的斜麵中，觀察能否產生如課本中圖2-10的顏色反應。
4.細菌的計數
當菌落數目穩定時，選取菌落數在30～300的平板進行計數。在同一稀釋度下，至少對3個平板進行重複計數，然後求出平均值，並根據平板所對應的稀釋度計算出樣品中細菌的數目。
6 疑難解答
（1）如何從平板上的菌落數推測出每克樣品中的菌落數？
（2）為什麽分離不同的微生物要采用不同的稀釋度？測定土壤中細菌的總量和測定土壤中能分解尿素的細菌的數量，選用的稀釋範圍相同嗎？
這是因為土壤中各類微生物的數量（單位：株/kg）是不同的，例如在幹旱土壤中的上層樣本中：好氧及兼性厭氧細菌數約為2185萬，放線菌數約為477萬，黴菌數約為23.1萬。因此，為獲得不同類型的微生物，就需要按不同的稀釋度進行分離，同時還應當有針對性地提供選擇培養的條件。
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