微生物檢測中培養基的質量控製措施

  微生物檢測中培養基的質量控製措施

 [摘要]培養基的質量是微生物檢測工作的基礎，事關檢測結果的準確性、可靠性。本文對微生物實驗室在培養基購置、貯存、製備、性能測試等方麵應采取的質量控製措施進行討論。以便微生物實驗室不斷完善和提高培養基的質控水平，為檢測工作提供高質量的培養基。

　　關鍵詞：培養基質量控製微生物檢測
　　
　　培養基是液體、半固體或固體形式的，含天然或合成成分，用於保證微生物繁殖或保持其活力的物質。培養基的製備和使用是微生物實驗室檢測工作的重要環節，培養基自身質量的優劣、保存是否得當、配製使用是否正確等都直接影響到檢測結果的準確性。本文對微生物實驗室在培養基購置、貯存、製備、使用等方麵應采取的質量控製措施進行討論，談一些觀點和看法。希望有助於微生物檢測工作的同行們更好的開展工作。
　　
　　1培養基的購置與驗收
　　
　　1.1購置
　　從培養基自身的質量來看，不同生產廠家的產品，甚至同一廠家不同批號的產品都會存在差異[1]。依據ISO/IEC17025《檢測和校準實驗室能力的通用要求》，對培養基的供應 企業 進行評價後選擇合格的供應商，這是培養基購買過程中重要的步驟。應選擇產品市場信譽度高、有質量保證能力和服務保證能力的企業；企業是否通過了質量管理體係的認證是較為客觀的評價指標。要求生產企業提供：培養基成分名稱及產品編號、批號、使用前的pH、儲藏信息和有效期、性能評價和所用測試菌株、技術數據清單、質控證書以及必要的安全/危害數據等材料[2]。
　　1.2驗收
　　購買的培養基到貨後，應有專人做好接受和驗收工作，應仔細核對生產企業提供的資料、培養基名稱、規格數量、外觀特征、批號、保質期是否符合要求。每批培養基到貨物後都應對培養基的質量進行檢測，滿足檢測方法規定的要求後方可投入使用。
　　
　　2培養基的儲存
　　
　　幹粉培養基應保存在陰涼幹燥處，要避免陽光直射；未開瓶的培養基在室溫下的最長保存2年，開瓶後的幹粉培養基易吸濕，應注意防潮並在6個月內用完。應定期對儲存中的培養基進行常規檢查，如容器密閉性複查、首次開封日期、內容物的感官檢查，如果培養基發生結塊、顏色異常和其他變質跡象就不能再使用。
　　
　　3培養基的製備
　　
　　3.1培養基用水
　　培養基製備用水應使用電阻率不小於30萬Ωcm的蒸餾水或與其同質的水，最好不使用離子交換器生產的去離子水。
　　3.2稱量
　　稱量時要用專用的角匙，避免交叉汙染而影響檢驗結果；幹粉培養基易吸潮，如有條件，盡量在濕度較低的房間稱取培養基。
　　3.3複水
　　複水時不得用銅鍋或鐵鍋，以防有離子混入培養基中，影響微生物的生長；容器的大小需大於複水後培養基總體積的2倍以上，避免在加熱溶解過程中，培養基溢出；含有瓊脂粉的培養基，在加熱溶解之前可以浸泡數分鍾；加熱培養基時一定要進行攪拌，特別是瓊脂類培養基。為避免燒焦和沸騰溢出，對於少量的培養基最好使用沸水浴進行加熱。燒糊的培養基營養物質被破壞，並可產生有毒物質，如發現焦化，或未溶解均勻前培養基有溢出，該培養基即不能使用，應重新製備。對於瓊脂類培養基進行再融化時應使用沸水浴或流動蒸汽進行加熱，最多隻能加熱兩次，第二次再融化後仍未用完的培養基應棄去。
　　3.4滅菌
　　一般培養基采用濕熱滅菌，即高壓蒸汽滅菌，通常是121℃15min，含糖或特殊培養基，按照國家標準或生產商提供的說明滅菌。已配製好的培養基必須立即滅菌，避免微生物生長繁殖而消耗養分，改變培養基的酸堿度。高溫可破壞培養基的營養成分，還會使瓊脂的凝膠強度下降，因此必須嚴格控製滅菌溫度和時間，並且不可重複滅菌。高壓蒸汽滅菌鍋的壓力表等要定期進行檢定，並定期采用生物指示菌法或化學變色紙片對滅菌效果進行驗證。
　　3.5pH測定
　　微生物必須在適宜的pH範圍內才能正常生長繁殖或體現其生物特性。培養基配方要求的pH為滅菌或消毒後的pH值，即培養基使用前的pH，並應在25℃溫度下采用精密酸度計進行測量，固體瓊脂培養基應以特殊的膠體表麵測量電極進行測量。使用過程中，如果需要調整培養基的pH，應用1mol/LNaOH或lmol/LHCL調整，注意不可反複調pH，否則會影響培養基的滲透壓[3]。
　　3.6配製好的培養基保存
　　滅菌以後培養基應該迅速冷卻至所需溫度，避免長時間保存在滅菌鍋內，造成過度滅菌，影響培養基的營養成分或選擇性效果。所配製的培養基的量，應該是在最長保存期限內正好使用完。含染料的培養基應閉光保存；倒好的瓊脂平板如果配製的當天未使用完，應於冷藏保存，如果保存時間超過2天，應將其放入密封的塑料袋中保存；配好的肉湯類培養基如果保存時間超過2個星期，應將其放在帶有螺旋蓋的試管或其它密閉的試管或容器中防止蒸發[4]。
　　
　　4培養基的性能測試
　　
　　4.1外觀控製
　　製備好的培養基應有相應的顏色，一般的培養基應澄清、無渾濁、無沉澱。使用前應檢查培養基的顏色是否發生變化，是否蒸發/脫水。
　　4.2汙染控製
　　從每批製備好的培養基中選取部分進行汙染測試（無菌試驗），確定無微生物生長方可使用。4.3性能測試
　　4.3.1測試菌株選擇測試菌株是具有其代表種的穩定特性並能有效證明實驗室特定培養基最佳性能的一套菌株，應來自國際/國家標準菌種保藏中心ATCC標準菌株[5]，菌株的選擇 參考 衛生行業標準WS/T232-2002《商業性微生物培養基質量檢驗規程》。
　　4.3.2定量測試方法改良Miles-Misra法測試菌株過夜培養物10倍遞增稀釋；測試平板和參照平板劃分為4個區域並標記；從最高稀釋度開始，分別滴一滴稀釋液於試驗平板和對照平板標記好的區域；將稀釋液塗滿整個1/4區域，37°C培養18小時；對易計數的區域計數，按公式 計算 生長率（生長率=待測培養基平板上得到的菌落總數/參考培養基平板上獲得的菌落總數）。非選擇性培養基上目標菌的生長率應不低於0.7，該類培養基應易於目標菌生長；選擇性培養基上目標菌的生長率應不低於0.1[6]。
　　4.3.3半定量測試方法改進的劃線法接種法平板分ABCD四區，共劃16條線，平行線大概相隔0.5cm，每條有菌落生長的劃線記作1分，每個僅一半的線有菌落生長記作0.5分，沒有菌落生長或生長量少於劃線的一半記作0分，分數加起來得到生長指數G。目標菌在培養基上應呈現典型的生長，而非目標菌的生長應部分或完全被抑製，目標菌的生長指數G大於6時，培養基可接受[6]。
　　4.3.4定性測試方法平板接種觀察法用接種環取測試菌培養物，在測試培養基表麵劃平行直線。按標準中規定的培養時間和溫度對接種後的平板進行培養，目標菌應呈現良好生長，並有典型的菌落外觀、大小和形態，非目標菌應是微弱生長或無生長[6]。
　　
　　5討論
　　
　　培養基的質量是微生物實驗室檢測工作的基礎，事關檢測工作的準確性、可靠性，在微生物實驗室檢測工作中舉足輕重。如果在工作中忽視任何一個環節的質量問題，都將導致檢驗結果 科學 性、客觀性的偏離。因此，加強培養基的實驗室質量控製，認真地做好培養基的質控工作，不斷完善和提高培養基的質控水平，才能為微生物檢測實驗室提供高質量的培養基。
　　
　　參考 文獻 
　　[1]唐細良，史娟，唐紫琳，等.影響衛生微生物檢驗質量的兩個因素研究[Ｊ].實用預防醫學，2000，7（4）：314-315.
　　[2]ISO/TS11133-1：2000.Microbiologyoffoodandanimalfeedingstuffs-Guidelinesonpreparationandproductionofculturemedia-Part1：Generalguidelinesonqualityassurancefortheprepatationofculturemediainthelaboratory[S].
　　[3]劉春梅，蔡芷荷，吳清平.食品衛生微生物檢驗中培養基的質量控製[Ｊ]. 中國 衛生檢驗雜誌，2007，17（4）：700-701.
　　[4]饒紅，陳廣全，馮騫，等.微生物實驗室培養基的質量保證措施[Ｊ].檢驗檢疫科學，2006，6（4）：31-33.
　　[5]WS/T232-2002.商業性微生物培養基質量檢驗規程[S].
　　[6]ISO/TS11133-2：2003.Microbiologyoffoodandanimalfeedingstuffs-Guidelinesonpreparationandproductionofculturemedia-Part2：Praticalguidelineonperformancetestingofculturemedia[S].

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