細菌總數的測定片操作方法

[貯藏]

1、未開封時，冷藏於≤8℃（≤46℉），並在保存期內用完，高溫度時，凝固水可以排除，包裝物最好於室溫啟開。 
2、已開封的，將封口以膠帶封緊。 
3、保存再封的袋於≤25℃（≤77℉）和溫度<50％，不要冷藏已開啟的包裝袋，並於一個月內使用完。  
        
[樣品製備]        
     
4、製備1：10和更大稀釋的食物樣品稀釋液，0稱取或吸取食物樣品，置入適宜的無菌容器內，如均質袋、稀釋瓶、WhirlPak bag或者其他滅菌容器內. 
5、加入適量的無菌稀釋液,包括Buffered peptone Buffer(IDF phopsphate buffer ,用0.0425g/L的KH2PO4調PH7.2) 、0.1%的蛋白膠水(ISO方法6887) 、緩衝蛋白膠水(ISO方法6579) 、鹽溶液(0.85-0.90%)、bisulfite-free letheen broth或蒸餾水. 不可使用含有枸櫞酸鹽、酸性亞硫酸鹽或硫代硫酸鹽的緩衝液. 因為它們能抑止菌生長。 
6、攪拌或均質樣品。
    樣品的稀釋液調PH6.5－7.2
    對酸性樣品的稀釋液用IN NaOH
    對堿性樣品用IN HCL調PH
 
 [接種]        
     
7、將測試片置於平坦表麵處，揭開上層膜。 
8、使用吸管將1mL樣液垂直滴加在測試片的中央處。 
9、允許使用上層膜直接落下，切勿向下滾動上層膜。  
 10、使用壓板隆起麵底朝下，放置在上層膜中央處。 
11、輕輕的壓下，使樣液均勻覆蓋於圓形的培養麵積上，切勿扭轉壓板。 
12、拿起壓板，靜置至少1分鍾以使培養基凝固。  
        
[培養-解釋]     
     
13、測試片的透明麵朝上，可堆疊至20片，對有一定濕度養箱能保持最少份損失是需要的。 
14、可目視及用標準菌落計數器或其它的照明放大鏡計數，並可參考 判讀卡計算菌落數。 
15、可以分離菌落作進一步鑒定，即掀起上層膜，由培養膠上挑取單個菌落。

MRS的操作步驟 ：
[樣品準備]        
     
1、按說明書要求的2倍用量製備2×MRS肉湯。例如：如果說明書要求1L水中加入55gMRS,則2×MRS則為1L水中加入110gMRS. 
2、用標準稀釋液製備1：10樣品稀釋液，該樣品稀釋液可用於檢測其他微生物。 
3、用1mL 3M電子加樣器將1：10樣品稀釋液做1：2稀釋。先取0.5mL肉2×MRS肉湯，然後再吸取0.5mL 1:10樣品稀釋液，混勻後即可獲得含單倍 MRS的1：20樣品稀釋液。  
4、接種：在PAC檢測片上接種1mL 1：20樣品稀釋液（0.5mL 1：10標準稀釋液+0.5mL 2×MRS肉湯＝1:20含單倍MRS的樣品稀釋液）。 
5、培養：厭氧培養測試片。將檢測片透明膜一麵朝上放入厭氧罐中，疊放數量不得超過20片。如果檢測片超過20片，可在同一罐中用一個堅硬的分隔器將檢測片分開培養。將厭氧罐放入30℃～35℃（86℃～95℉）培養箱中培養48＋3h. 
6、判讀：PAC測試片可在標準菌落計數器或其他放大光源下計數。測試片賞的菌落數×稀釋倍數（20）即為每毫升樣品中酸乳菌數。詳見 判讀手冊。

*MRS肉湯的操作程序 
1、  按說明書要求的4倍用量製備4*MRS肉湯 
2、  用標準稀釋液製備1：10樣品稀釋液（11g/99mL或25g/225mL）。取8mL供其它種類的微生物檢測用。 
3、  將4*MRS肉湯加入1：10標準樣品稀釋液中，將獲得含0.5 MRS的樣品稀釋液。 
   * 如果稀釋液中含有11g樣品、99mL標準稀釋液，接種其它微生物測試片後，再加入18mL 4*MRS肉湯。
PAC測試片上生長的菌落數乘以11即為最終結果（個/g）。 
* 如果稀釋液中含有25g樣品、255mL標準稀釋液，接種其它微生物檢測片後，再加入41mL 4*MRS肉湯。
PAC測試片上生長的菌落數乘以11即為最終結果（個/g）。

乳酸菌檢測方法 
[樣品準備]       
     
1、製備至少1：10或更高稀釋度的樣品稀釋液。稱量食品樣品於WirPak取樣袋、均質袋、稀釋瓶或其它適合的消容器中。 
2、加入適當的肉湯稀釋液，稀釋液的配置方法根據說明書製備。如果使用一種1：10稀釋液檢測多種微生物，
3、如果需要進行多倍稀釋，肉湯稀釋液隻能用於最終稀釋步驟。初始稀釋可使用標準稀釋液，包括磷酸鹽緩衝液（ID）F磷酸鹽緩衝液，0.0425g/L KH2POI4 Ph7.2) 、0.1%蛋白膠水，蛋白膠鹽稀釋液（ISO方法6887）、蛋白膠水緩衝液（ISO方法6579）、生理鹽水（0.85～0.90％），不含亞硫酸氫鹽的 Letheen肉湯或蒸餾水，每步稀釋都應充分混勻。  
4、接種：按操作說明接種1.0mL樣品稀釋液於Petrifilm. 
5、培養：厭氧培養測試片。將測試片透明麵朝上放入GASPak厭氧罐中，疊放數量不得超過20片。如果檢測片超過20片，可在同一罐中用一個堅硬的分隔器將檢測片分開培養。將厭氧罐放入30℃～35℃（86℉～95℉）培養箱中培養48±3h. 
6、判讀：Petrifilm: PAC測試片可在標準菌落計數器或其他放大光源下計數。測試片賞的菌落數乘以稀釋倍數，可獲得每毫升樣品中酸乳菌

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