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微生物學檢驗專題:微生物學檢驗基本技術(3)



錄入時間:2010-10-18 9:46:03 來源:生物化學資料網

 

四、血清學試驗基本技術

血清學試驗是根據抗原與相應的抗體在適宜的條件下,能在體外發生特異性結合的原理,用已知抗體或抗原來檢測未知抗原或抗體。因抗體主要存在於血清中,抗原或抗體檢測時一般都要采用血清,故體外的抗原抗體反應亦稱為血清學試驗或血清學反應。血清學試驗包括血清學鑒定和血清學診斷。血清學鑒定即用含已知特異性抗體的免疫血清(診斷血清)去檢測患者標本中或培養物中的未知細菌或細菌抗原,以確定病原菌的種或型。血清學診斷是指用已知抗原檢測病人血清中的相應抗體,以診斷感染性疾病的方法。血清學試驗是臨床微生物學檢驗的重要方法之一。血清學試驗基本類型包括凝集反應、沉澱反應和補體結合反應等。

()凝集反應

顆粒性抗原(細菌、紅細胞、乳膠等)與相應抗體可發生特異性結合,在一定條件下(電解質、pH、溫度、抗原抗體比例適合等)出現肉眼可見的凝集小塊,稱為凝集反應。參與反應的抗原稱凝集原,抗體稱為凝集素。凝集反應可分為直接凝集反應和間接凝集反應兩大類。

1.直接凝集反應

2.間接凝集反應

(二)沉澱反應

()補體結合反應

(四)莢膜腫脹試驗

(五)製動試驗

五、分子生物學技術在微生物檢驗中的應用

分子生物學技術的迅速發展,拓展了微生物學檢驗方麵的應用空間。該技術具有敏感、特異、安全和快速等特點,在微生物檢驗中發揮著日益重要的作用。本節簡要介紹分子生物學技術在微生物檢驗中的應用,具體檢測方法參見有關專著或試劑盒說明書。

(一)分子生物學技術在細菌分類中的應用

(二)分子生物學技術在細菌鑒定中的應用

(三)分子生物學技術在細菌藥敏試驗中的應用


六、自動化微生物鑒定和藥敏分析係統在微生物檢驗中的應用

微生物鑒定的自動化技術近十幾年得到了快速發展。數碼分類技術集數學、計算機、信息及自動化分析為一體,采用商品化和標準化的配套鑒定和抗菌藥物敏感試驗卡或條板,可快速準確地對臨床數百種常見分離菌進行自動分析鑒定和藥敏試驗。目前自動化微生物鑒定和藥敏分析係統已在世界範圍內臨床實驗室中廣泛應用。
(一)微生物數碼鑒定法:

早在七十年代中期,一些國外公司就研究出借助生物信息編碼鑒定細菌的新方法。這些技術的應用,為醫學微生物檢驗工作提供了一個簡便、科學的細菌鑒定程序,大大提高了細菌鑒定的準確性。目前,微生物編碼鑒定技術已經得到普遍應用,並早已商品化和形成獨特的不同細菌鑒定係統。如APIMicro-IDRapIDEnterotubeMinitek等係統。這種鑒定係統是自動化鑒定係統的基礎。

1.數碼鑒定法基本原理

2.數碼鑒定在臨床上的應用

(二)自動化的微生物鑒定和藥敏試驗分析係統

自動化的微生物鑒定和藥敏試驗分析係統在臨床微生物實驗室的應用,為微生物檢驗工作者對病原菌的快速診斷和藥敏試驗提供了有力工具。鑒定係統的工作原理因不同的儀器和係統而異。不同的細菌對底物的反應不同是生化反應鑒定細菌的基礎,而試驗結果的準確度取決於鑒定係統配套培養基的製備方法、培養物濃度、孵育條件和結果判定等。大多鑒定係統采用細菌分解底物後反應液中pH的變化,色原性或熒光原性底物的酶解,測定揮發或不揮發酸,或識別是否生長等方法來分析鑒定細菌。

藥敏試驗分析係統的基本原理是將抗生素微量稀釋在條孔或條板中,加入菌懸液孵育後放入儀器或在儀器中直接孵育,通過測定細菌生長的濁度,或測定培養基中熒光指示劑的強度或熒光原性物質的水解,觀察細菌的生長情況。在含有抗生素的培養基中,濁度的增加提示細菌生長,根據判斷標準解釋敏感或耐藥。
1.半自動化細菌鑒定和藥敏分析係統

1.       全自動的微生物鑒定和藥敏試驗分析係統

3.使用自動化鑒定儀的局限性


(三)自動化的血液細菌培養係統

(四)結核分枝杆菌快速檢測係統

 

 

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