瓊脂稀釋法測定抗菌藥物最低抑菌濃度(MIC)

瓊脂稀釋法是將不同劑量的抗菌藥物，加入融化並冷至50℃左右的定量MH瓊脂中，製成含不同遞減濃度抗菌藥物的平板，接種受試菌，孵育後觀察細菌生長情況，以抑製細菌生長的瓊脂平板所含最低藥物濃度為MIC。本法優點是可在一個平板上同時作多株菌MIC測定，結果可靠，易發現汙染菌；缺點是製備含藥瓊脂平板費時費力。
1.培養基製備
使用MH瓊脂，按商品說明書進行配製，pH7.2~7.4。淋病奈瑟菌使用GC瓊脂基礎加1%添加劑；其它鏈球菌使用含5%（V/V）綿羊血的MH瓊脂（當試驗磺胺藥時，使用溶解的馬血）。
2.含藥瓊脂平板製備
根據實驗設計，將已倍比稀釋的不同濃度的抗菌藥物分別加入已加熱溶解，並在45~50℃水浴中平衡的MH瓊脂中，充分混勻傾倒滅菌平皿，瓊脂厚度3~4mm。通常按1∶9比例配製藥物瓊脂平板，根據需要來選擇藥物濃度範圍。配製好的含藥瓊脂平板應裝入密封塑料袋中，置2~8℃冰箱可貯存5天。
3.接種物製備與接種
製備濃度相當於0.5麥氏標準比濁管的菌懸液，再1∶10稀釋，以多點接種器吸取製備好菌液（約1~2μl）接種於瓊脂平板表麵，每點菌數約為10⁴CFU，形成直徑為5~8mm的菌斑。接種好後置35℃孵育16~20h（甲氧西林耐藥葡萄球菌、萬古黴素耐藥腸球菌孵育時間應滿24h），觀察結果。奈瑟菌屬、鏈球菌屬細菌置5%二氧化碳、幽門螺杆菌置微需氧環境中孵育。
4.結果判斷
將平板置於暗色、無反光物體表麵上判斷試驗終點，以抑製細菌生長的最低藥物濃度為MIC。在含甲氧苄胺嘧啶或磺胺瓊脂平板上可見輕微細菌生長，與生長對照比較抑製80%以上細菌生長的最低藥物濃度作為終點濃度。
如果出現有2個以上菌落生長於含藥濃度高於終點水平的瓊脂平板上，或低濃度藥物瓊脂平板上不長而高濃度藥物瓊脂平板上生長現象，則應檢查培養物純度或重複試驗。

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