公共場所毛巾、床上臥具微生物檢驗方法

中華人民共和國國家標準

公共場所毛巾、床上臥具微生物檢驗方法

細 菌 總 數 測 定

GB/T 18204.4-2000

1 範圍

本標準規定了公共場所毛巾、床上臥具細菌總數的測定方法。

本標準適用於公共場所內公用毛巾、床上臥具細菌總數的測定。

2 引用標準

下列標準所包含的條文，通過在本標準中引用而構成為本標準的條文。本標準出版時，所示版本均為有效。所有標準都會被修訂，使用本標準的各方應探討使用下列標準最新版本的可能性。

GB /T 18204.2-2000 公共場所茶具微生物檢驗方法細菌總數測定

3 定義

本標準采用下列定義。

細菌總數aerobicbacterialcount

指被檢物品經過采樣處理，在一定條件下培養後(培養基成分、培養溫度、培養時間、pH值、需氧性質等),25 cm²表麵上所含菌落的總數。本方法規定的培養條件下所得結果，隻包括一群在營養瓊脂上生長發育的嗜中溫性需氧菌落總數。

細菌總數主要作為判定公用毛巾、床上臥具被汙染程度的標誌，檢測細菌總數，為公用毛巾、床上臥具清洗消毒效果的判定和評價提供依據。

第一法 塗抹法

4 儀器

見GB/T 18204. 2-2000中第4章

5 培養基和試劑

見GB/T 18204.2-2000中第5章。

6 檢驗程序

見GB/T 18204. 2-2000中第6章。

7 操作步驟

7.1 采樣方法

7.1.1 隨機抽取清洗消毒後準備使用的毛巾、床上臥具。

7.1.2 用滅菌生理鹽水濕潤棉拭子，在毛巾、枕巾對折後兩麵的中央各25cm²(5cm ×5cm)麵積範圍;床單、被單在上下兩部各25cm²麵積範圍內有順序地來回塗抹，用滅菌剪刀剪去棉簽手接觸的部分，將棉拭子放入10mL生理鹽水內，4h內送檢。

7.2 檢驗方法

7.2.1 將放有棉拭子的試管充分振搖。此液為1:10稀釋液。

7.2.2 以無菌操作，吸取2 mL檢樣，分別注人到兩塊滅菌平皿內，每皿1 mL。如汙染嚴重，可十倍遞增稀釋，即吸取1 mL加到9 mL滅菌生理鹽水中，混勻，此液為1:100稀釋液。每個稀釋度做兩塊平皿。

7.2.3 將已融化冷至45℃左右的營養瓊脂培養基傾入平皿，每皿約15 mL，並立即旋搖平皿。冷凝後放36℃士1℃培養箱培養48 h.

8 菌落計數方法

作平皿菌落計數時，可用肉眼直接觀察，必要時用放大鏡檢查以防遺漏，在記下各平皿的菌落數後，求出同一稀釋度各平皿生長的平均菌落數。若平皿中有連成片狀的菌落，該平皿不宜計數;若片狀菌不到平皿中的一半，而其餘一半中菌落分布均勻，則可將此半個平皿菌落計數後乘以2，所得結果代表全皿菌落數。

公用毛巾、床上臥具細菌總數按公式(1)計算:

M=k·n/2

式中:M— 細菌總數，cfu/25

     K— 稀釋倍數;

     n— 平均菌落數。

9 菌落數報告方式

見GB/T 18204. 2-2000中第9章。

第二法戳印法

10 原理

用特製的內徑為3.57cm 的培養皿，注入營養瓊脂培養基，使其表麵比皿邊高2-3mm。采樣時將培養基表麵和被檢物品表麵吻合，輕輕按壓3-4s，使其被檢查物體表麵能夠均勻地與培養基表麵接觸。然後蓋上皿蓋，置恒溫箱37℃培養24 h後，計數培養基表麵(10cm,)生長的細菌菌落數。

11 培養基和試劑

11.1營養瓊脂培養基

11.1.1成 分:蛋白腖   10g

            牛肉膏   3 g

            氯化鈉   5 g

            瓊脂     15-20g

            蒸餾水  1000 mL

11.1.2 製法:將上述成分混合後，加熱溶解，調pH為7.4-7.6 ，過濾、分裝於玻璃容器中，經121℃滅菌20 min，儲存於冷暗處備用。

12 儀器

12.1 高壓蒸汽滅菌器

12.2 幹熱滅菌器

12.3 恒溫箱。

12.4 冰箱。

12.5 特製戳印平皿(內徑3.57cm),

12.6 製備培養基用的一般器材。

13 檢驗步驟

13.1 將溶化並冷至50-55℃的營養瓊脂培養基，傾注於已滅菌的特製戳印平皿內(使皿內部培養基平麵比皿邊緣高2-3 mm)，每皿約10 mL，待凝固後，蓋上皿蓋(皿蓋與培養基隔一定空間)，翻轉平皿，在4℃下保存備用。

13.2 將被檢物品放平，再將皿蓋打開，放在被檢物品表麵上，用手輕輕按壓3-4s，取下，蓋上皿蓋，置37℃恒溫箱內，培養24 h後觀察結果，計數細菌菌落數。

14 結果計算

用肉眼觀察，點數培養基表麵菌落數，其細菌總數為10cm,(每皿)表麵積的菌落數。本法簡 便易行、可靠，可直接采樣做細菌培養。

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