一、目的
掌握水中細菌總數的監測方法和衛生學意義
國家標準規定的細菌總數監測方法為：標準平板計數法
一、原理
細菌總數係指
二、儀器設備及共用器材和試劑
1.高壓蒸汽滅菌器；2.電熱幹燥箱；3.恒溫培養箱；4.電冰箱；5.電熱恒溫水浴鍋；6.電爐；7.放大鏡；8.滅菌鑷子；9.酒精燈：每組1隻；10.滅菌棉球；11.營養瓊脂；12.記號筆
三、材料和試劑
毫升無菌吸管一支；2.滅菌平皿3個；3.無菌采樣瓶（管）1個
四、采樣及樣品處理
1. 采樣容器必須先進行滅菌，並保證在運送、保存過程中不受汙染。
2. 采自來水水樣時，先用酒精燈將水籠頭燒灼消毒，然後將水籠頭完全打開，放水5-10分鍾後采樣，經常用的水籠頭放水1-3分鍾即可。
3. 采水源水時，應選擇有代表性的地點及水質可疑的地方，一般應距水麵0.2
4. 采集含有餘氯的水樣時，應在采樣瓶中加入無菌的1.5%硫代硫酸鈉溶液以中和水中餘氯的殺菌作用，按每500毫升水樣加2毫升計算。
5. 采樣量應為瓶容量的80%，以便在檢驗時搖動。
6. 采集水樣後應立即記錄水樣名稱、地點、時間等項目，並應盡快檢驗，一般不超過2小時，放冰箱中保存也不應超過4小時。
五、操作方法
1. 將采樣管（瓶）用力振蕩80次，使可能存在的細菌充分分散開。
2. 用1毫升滅菌吸管吸取管內液（1:10稀釋）1毫升，放入含9毫升生理鹽水管中（1:100稀釋），振蕩10次或吹打混勻
3. 用另一支1毫升滅菌吸管吸取管內液（1:100稀釋）1毫升，放入含9毫升生理鹽水管中（1:1000稀釋），振蕩10次或吹打混勻，餘此類推。
4. 用同一支吸管從高稀釋度管開始分別吸取1毫升放入一個無菌平皿內，每個樣品作兩個稀釋度，每個稀釋度作兩個平皿為平行樣。
5. 於每個平皿中傾注15毫升左右已經融化並冷卻到
6. 待瓊脂冷卻凝固後，翻轉平皿，使底麵朝上，置
六、注意事項
1. 全部操作過程必須無菌。
2. 采集的樣品應根據可能的細菌汙染程度進行倍比稀釋，並選擇兩個最適稀釋度檢驗。如自來水以檢測原倍水樣為宜，一般的物體表麵以1:10和1:100稀釋較為合適，而化妝品應進行1:1000稀釋，散裝鮮牛奶以1:10000為宜。
3. 營養瓊脂的溫度不能過高和過低，而且必須與樣品充分混勻。
七、菌落計數及報告方式
平皿菌落計數可用肉眼觀察，必要時用放大鏡觀察，注意菌落與雜質的區別。
1. 計算同一稀釋度的平均菌落數，若其中一個平皿內有較大片狀菌落生長則不計該平皿；若片狀生長的菌落未超過平皿的一半時可按菌落分布均勻的另一半平皿菌落數×2計算。
2. 先計算平均菌落數在30-300之間的平皿，如隻有一個稀釋度的平均菌落數在此範圍，則以該平均菌落數乘以其稀釋倍數報告。若有2個稀釋度的菌落數在此範圍，則應按二者的比值來決定，若比值≤2則報告兩者的平均數，比值＞2則報告其中較小稀釋度的菌落數。
3. 如所有稀釋度的菌落數均＞300，則報告最高稀釋度的平均菌落數乘以其稀釋度。
4. 如所有稀釋度的菌落數均＜30，則應以稀釋度最低的平均菌落數乘以其稀釋度報告。
5. 如所有稀釋度的平均菌落數均不在30-300之間，應以最接近30或300的菌落數乘以其稀釋倍數報告。
6. 菌落計數的報告，100以內時按實際數報告，＞100時采用二位有效數字的以10的指數形式表示。
7. 如菌落難以計數則應報告“無法計數”並注明稀釋倍數。
八、結果計算
CFU/毫升或克＝平均菌落數×稀釋倍數
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