中文版  |   English  |   加入收藏  |   客服熱線:400-0532-596
微生物技術資料
文章檢索
  首頁 > 微生物知識->細菌基本知識和檢測方法->水中細菌總數的測定和大腸菌群的檢測（2）

水中細菌總數的測定和大腸菌群的檢測（2）



錄入時間:2010-9-25 11:22:11 來源：生物信息網
1)生活飲用水或食品生產用水的檢驗：
 
    ①初步發酵試驗：
    在2個各裝有50mL的3倍濃縮乳糖膽鹽蛋白腖培養液(可稱為三倍乳糖膽鹽)的三角瓶中(內有倒置杜氏小管)，以無菌操作各加水樣100mL。在10支裝有5mL的三倍乳糖膽鹽的發酵試管中(內有倒置小管)，以無菌操作各加入水樣10mL。如果飲用水的大腸菌群數變異不大，也可以接種3份100mL水樣。搖勻後，37℃培養24h。
    ②平板分離：
    經24h培養後，將產酸產氣及隻產酸的發酵管(瓶)，分別劃線接種於伊紅美藍瓊脂平板(EMB培養基)上，37℃培養18—24h。大腸菌群在EMB平板上，菌落呈紫黑色，具有或略帶有或不帶有金屬光澤，或者呈淡紫紅色，僅中心顏色較深；挑取符合上述特征的菌落進行塗片，革蘭氏染色，鏡檢。
 ③複發酵試驗：
 將革蘭氏陰性無芽胞杆菌的菌落的剩餘部分接於單倍乳糖發酵管中，為防止遺漏，每管可接種來自同一初發酵管的平板上同類型菌落1—3個，37℃培養24h，如果產酸又產氣者，即證實有大腸菌群存在。
    ④報告：
    根據證實有大腸菌群存在的複發酵管的陽性管數，查表2（或表3），報告每升水樣中的大腸菌群數(MPN)。
    2)水源水的檢驗：
    用於檢驗的水樣量，應根據預計水源水的汙染程度選用下列各量。
    ①嚴重汙染水：1，0．1，0．01．0．00lmL各1份。
    ②中度汙染水：10．1，0．1，0．01mL各1份。
    ③輕度汙染水：100，10，1，0．1mL各l份。
④大腸菌群變異不大的水源水：10mLl0份。
表2 大腸菌群檢索表（飲用水）

 
0
1
2
備注
每升水樣中大腸菌群數
0
＜3
4
11
接種水樣總量300mL（100 mL2份，10 mL10份）
1
3
8
18
2
7
13
27
3
11
18
38
4
14
24
52
5
18
30
70
6
22
36
92
7
27
43
120
8
31
51
161
9
36
60
230
10
40
69
＞230

 
 表3 大腸菌群數變異不大的飲用水

陽性管數
0
1
2
3
接種水樣總量300mL（3份100 mL）
每升水樣中大腸菌群數
＜3
4
11
＞18

 
表4 大腸菌群檢索表（嚴重汙染水）

接種水樣量/mL
每升水樣中大腸菌群數
備注
1
0.1
0.01
0.001
-
-
-
-
＜900
接種水樣總量為1.111（1，0.1，0.01，0.001mL各一份）
-
-
-
+
900
-
-
+
-
900
-
+
-
-
950
-
-
+
+
1800
-
+
-
+
1900
-
+
+
-
2200
+
-
-
-
2300
-
+
+
+
2800
+
-
-
+
9200
+
-
+
-
9400
+
-
+
+
18000
+
+
-
-
23000
+
+
-
+
96000
+
+
+
-
238000
+
+
+
+
＞238000

 
 表5大腸菌群檢索表（中度汙染水）
 

接種水樣量/mL
每升水樣中大腸菌群數
備注
10
1
0.1
0.01
-
-
-
-
＜90
接種水樣總量為11.11（10，1，0.1，0.01 mL各一份）
-
-
-
+
90
-
-
+
-
90
-
+
-
-
95
-
-
+
+
180
-
+
-
+
190
-
+
+
-
220
+
-
-
-
230
-
+
+
+
280
+
-
-
+
920
+
-
+
-
940
+
-
+
+
1800
+
+
-
-
2300
+
+
-
+
9600
+
+
+
-
23800
+
+
+
+
＞23800

 
 表6大腸菌群檢索表（輕度汙染水）

接種水樣量/mL
每升水樣中大腸菌群數
備注
100
10
1
0.1
-
-
-
-
＜9
接種水樣總量為111.1（100，10，1，0.1mL各一份）
-
-
-
+
9
-
-
+
-
9
-
+
-
-
9.5
-
-
+
+
18
-
+
-
+
19
-
+
+
-
22
+
-
-
-
23
-
+
+
+
28
+
-
-
+
92
+
-
+
-
94
+
-
+
+
180
+
+
-
-
230
+
+
-
+
960
+
+
+
-
2380
+
+
+
+
＞2380

 
表7 大腸菌群變異不大的水源水

陽性管數
0
1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
每升水樣中大腸菌群數
＜10
11
22
36
51
69
92
120
160
230
＞230
備注
接種水樣總量100mL(10mL10份)

操作步驟同生活用水或食品生產用水的檢驗。同時應注意，接種量1mL及1mL以內用單倍乳糖膽鹽發酵管；接種量在1mL以上者，應保證接種後發酵管(瓶)中的總液體量為單倍培養液量。然後根據證實有大腸菌群存在的陽性管(瓶)數，查表4、表5、表6或表7，報告每升水樣中的大腸菌群數(MPN)。
    附：濾膜法
    濾膜法所使用的濾膜是一種微孔濾膜。將水樣注入已滅菌的放有濾膜的濾器中，經過抽濾，細菌即被均勻地截留在膜上，然後將濾膜貼於大腸菌群選擇性培養基上進行培養。再鑒定濾膜上生長的大腸菌群的菌落，計算出每升水樣中含有的大腸菌群數(MPN)。
    (1)準備工作：
        1)濾膜滅菌：
將3號濾膜放入燒杯中，加入蒸餾水，置於沸水浴中蒸煮滅菌3次，每次15min。前兩次煮沸後需換無菌水洗滌2-3次，以除去殘留溶劑。
    2)濾器滅菌：準備容量為500mL的濾器，用點燃的酒精棉球火焰滅菌，也可用121℃高壓滅菌20min。
     3）培養：
將品紅亞硫酸鈉培養基放入37℃培養箱內預溫30-60min。
    (2)過濾水樣：
    1)用無菌鑷子夾取滅菌濾膜邊緣部分，將粗糙麵向上貼放於已滅菌的濾床上，輕輕地固定好濾器漏鬥。水樣搖勻後，取333mL注入濾器中，加蓋，打開濾器閥門，在—50kPa壓力下進行抽濾。
    2)水樣濾完後再抽氣約5s，關上濾器閥門，取下濾器，用無菌鑷子夾取濾膜邊緣部分，移放在品紅亞硫酸鈉培養基上，濾膜截留細菌麵向上與培養基完全緊貼，兩者間不得留有間隙或氣泡。若有氣泡需用鑷子輕輕壓實，倒放在37℃培養箱內培養16-18h。
    (3)結果判定：
    1)挑選符合下列特征的菌落進行革蘭氏染色，鏡檢。
    ①紫紅色，具有金屬光澤的菌落。
②深紅色，不帶或略帶金屬光澤的菌落。
   ③淡紅色，中心顏色較深的菌落。
    2)凡是革蘭氏陰性無芽胞杆菌，需再接種於乳糖蛋白腖半固體培養基，37℃培養6-8h，產氣者，則判定為大腸菌群陽性。
    3)1L水樣中大腸菌群數等於濾膜法生長的大腸菌群菌落數乘以3。

 

上一篇：水中細菌總數的測定和大腸菌群的檢測（1）

下一篇：食品中細菌總數的測定

首頁 | 關於我們 | 網上商城 | 在線客服 | 聯係我們
業務聯係電話
   400-0532-596 0532-66087773
   0532-66087762 0532-81935169
郵箱：qdhbywg@vip.126.com
地址：青島市城陽區錦匯路1號A2棟
產品技術谘詢
  工作日(周一至周六8:00-18:00)：
  18562658263 13176865511
  其它時段：13105190021
投訴與建議：13105190021 13006536294