大腸杆菌在增菌培養基中的生長實驗

摘要

目的     觀察大腸杆菌在增菌培養基中繁殖的差異。

 

方法     通過不同來源大腸杆菌在三種增菌培養基中繁殖菌落數的，及在固體培養基中菌落大小的比較和對數生長實驗，比較大腸杆菌在不同培養液中繁殖的差異。

 

結果     大腸杆菌在硫乙醇酸鹽液體培養基中繁殖的速度最快，營養肉湯其次，膽鹽乳糖增菌液最慢。

 

結論     大腸杆菌在營養肉湯、硫乙醇酸鹽液體培養基、 膽鹽乳糖增菌培養基中，培養8h的菌落數，存在顯著差異( t測驗，χ²測驗) 。

 

    中國藥典2000年版規定，檢測大腸杆菌的增菌培養基采用膽鹽乳糖，是因為膽鹽能抑製革蘭陽性細菌的生長，乳糖有利於腸道杆菌的生長，提高陽性菌的檢出率。大腸杆菌在不同增菌液中的生長、繁殖的速度存在顯著差異。

1 實驗材料

1.1 培養基

    膽鹽乳糖增菌液( BL )，批號980521 ; 硫乙醇酸鹽液體培養基( FT )，批981216;營養肉湯( MH )，批號980607 ;三種培養液瓊脂培養基，在其液體培養基中加入2%瓊脂; 伊紅美藍瓊脂培養基，批號980626 ;均購於中國藥品生物製品檢定所。

1.2 菌種

    大腸杆菌[CMCCB 44102，大₄₄₁₀₂]由中國藥品生物製品檢定所提供; 大₁，大₂由食品中分離; 大₃，大₄由大鼠糞便中分離，大₅，大₆由藥品中分離。均在EMB平板上為紫黑色、圓形、凸起、光滑濕潤，有金屬光澤。均發酵乳糖，產酸，產氣、IMViC 為+ + - - ， 大₄₄₁₀₂、大₁、大₂、大₃及大₄ 的MUG熒光強度為(+ + +) ， 大₅ 為弱熒光( + + ) ， 大₆ 無熒光。

2 實驗方法與結果

2 . 1 菌懸液製備

取各大腸杆菌斜麵上的菌苔—白金耳，分別接種於9mL營養肉湯培養基中，培養18h， 用生理鹽水稀釋成每1mL含50-1000CFU。

2 . 2 菌落數的比較實驗

取50-100CFU的菌懸液，分別加入10ML的三種增菌液中。於37℃培養8h，用生理鹽水稀釋成1:100，分取0.1 mL用L棒塗於EMB培養基上，於37℃培養18h，計數。結果見表1 。

大腸杆菌在三種增菌液中8h菌落數的比較實驗

注：數據為10個平皿菌落數的平均值與BL組比較，*P<0.05，**P<0.01

 

2 . 3 菌落大小的比較實驗

取50-1000CFU菌懸液0.1mL 用L 棒塗於三種增菌液瓊脂培養基上，於37℃培養18h， 測量菌落直徑。結果見表2。

表2 大腸杆菌在三種增菌液的固體培養基中菌落大小的比較實驗（mm）

注：數據為10個菌落直徑（mm）的平均值，與BL組比較，*P<0.05，**P<0.01

 

 

 

 

2 . 4 對數生長實驗

取50-1000CFU菌懸液分別加人10mL的三種增菌液中，於37℃培養6, 12 , 18 h，稀釋成適宜濃度，取0.1mL用L棒塗於三種增菌液瓊脂培養基上，於37℃培養18h，計數。取常用對數。結果見表3。

表3 大腸杆菌在三種增菌液中的對數生長實驗

 

注：數據為10個平皿菌落數的平均值，與BL組比較，*P<0.05,**P<0.01

 

3 討論

    通過對不同來源大腸杆菌在三種增菌培養基中培養8h的菌落數、菌落大小和生長速度進行了對比實驗，采用t 測驗，比較MH 、FT與BL增菌培養基對同一株大腸杆菌生長影響的差異程度; 采用χ²測驗， 比較MH , FT與BL增菌培養基對大腸杆菌生長影響的差異程度。結果，大腸杆菌在MH , FT與BL增菌培養基中培養8h 的菌落數，存在顯著差異( t測驗，P <0.05 或P < 0.01；χ²測驗， 樣本χ²>χ²_（1） 0.05，樣本χ²>χ²_（1）0. 01 )。大腸杆菌在FT固體培養基中菌落大小與BL固體培養基比較，存在顯著差異(χ²測驗，樣本χ²>χ²_（1）0.05 )。藥品中汙染的大腸杆菌因受到原料的處理、幹燥、加溫等加工過程的影響， 存活的細菌受到不同程度的損傷，對於合成生產或半合成生產的藥品，汙染腸道杆菌的幾率小， 由於膽鹽乳糖增菌液中含有選擇性抑菌成分，往往不易獲得陽性結果，將樣品接種無選擇性的增菌培養基中，如MH和FT，進行培養，使受損傷的細菌得以恢複，少量汙染菌也能迅速增殖。在口服製劑大腸杆菌檢驗中應合理選擇培養液。