玫瑰植物組培研究方案

      玫瑰（Rosa rugosa）是薔薇科、薔薇屬直立灌木，花色豔麗，香氣宜人，是世界上重要的觀賞花卉之一，亦是提製香精用於各類高級食品、化妝品的重要原料。玫瑰品種繁多，其園藝品種為重瓣、不結實，多采用扡插、嫁接、壓條等無性繁殖，所需周期長，產量有限，遠遠不能滿足市場需求。玫瑰品種改良傳統上依靠自然或人工選擇、自然突變、育種進展一直比較緩慢，主要是由於大多數栽培品種為四倍體和高度異質性，而且基因庫貧乏，常導致自交不孕和雄性不育，致使通過傳統的育種方法改良品種的過程變得冗長。遺傳工程技術隊改良現存品種顯示了極大的潛力，這樣可以不破壞生產上理想的表型性狀而引入需要的外源基因，改良性狀包括抗病蟲、花色、花形、瓶插壽命等。玫瑰轉基因的研究一直受到人們的關注，建立良好的受體係統是玫瑰遺傳轉化的重要環節。

 

 試管繁殖技術：

    1 生產工藝流程

     帶腋芽段   誘導不定芽   生根培養   移栽

    2 快繁技術要點

    （1）選材 消毒和接種 選優良鍵壯 當年生枝條中段（帶飽滿而未萌發的側芽），用自來水衝洗幹淨， 流水衝洗10—30分鍾，用0.1％—0.15％的綠化汞醇溶液消毒8—12分鍾，無菌水洗4—5次，剪成1—2厘米，帶腋芽的莖段接種。培養溫度21℃—25℃，光照強度為1000LX—2000LX，每天光照12小時。

   （2）誘導叢生芽  將消毒好的帶腋芽莖段接於MS+6-BA2.0毫克/升+NAA0.1+GA3 2.0毫克/升+蔗糖30克/升的培養基上，2周—3周後腋芽可長至1厘米左右。然後將長出的腋芽轉入MS+BA0.2毫克/升+NAA0.5毫克/升+LH500毫克/升+蔗糖1000毫克/升的培養基上，5周—6周可繼代增殖一次，形成許多叢生芽。

    （3）繼代培養  將形成叢生芽的玫瑰長至2—3厘米左右，在無菌條件下將愈傷組織切成1毫米直徑的小塊，接種到G+BA0.4毫克/升+NAA0.1毫克/升+LH500毫克/升+蔗糖3500毫克/升的培養基上進行繼代培養，每周轉移到新鮮培養基上一次，大約3周後愈傷組織表麵開始形成半球形突起，4—6周後小突起開始向上發生極性生長，突起呈圓柱形，高出愈傷組織體表麵0.6mm至1mm，一般在1—2mm2的愈傷組織體上就能產生一個小突起，即為胚壯體。胚壯體內已具備完整的中柱和不完全的韌皮部和周皮。胚壯體已發生極性生長，與植物胚有著同等的意義。

 

      培養條件對組織培養的作用和影響

 

  1 生長素  在G培養基中分別加入NAA、IAA、0.01、0.05、1.0、和2.0毫克/升，進行外植體誘導愈傷組織的研究，結果的NAA不僅比IAA愈傷組織誘導率高，而且愈傷組織存活率也高。NAA比IAA愈傷組織誘導率高14％，愈傷組織存活率高5.3％，NAA的濃度以0.5毫克/升最好，在愈傷組織誘導率和存活率都達到較高值時IAA以2.0毫克/升最好。

  2 細胞分裂素  試驗用0.2—50毫克/升6-BA在G培養基上觀察了愈傷組織誘導率，以1.0毫克/升誘導率最高、達43％，結果表明玫瑰外植體培養需較高濃度的6-BA。

  3 赤黴素  使用GA3所進行的實驗表明休眠枝條使用0.1毫克/升GA3處理後，不僅新芽萌發率提高，而且外植體的生活率也相應提高、從而提高培養的成功率。

  4 溫度  愈傷組織的產生和生長發育速度與溫度有很大的關係，溫度高於28℃以上對愈傷組織的產生和發育不利，在15℃以下愈傷組織則停止生長，23℃不僅有利於愈傷組織的產生，而且發育也快。誘導率達47.6％。

  5光照  用不同的光照時間處理的結果表明，玫瑰外植體產生愈傷組織過程中對光照十分敏感，在有光和無光的條件下都可長出愈傷組織，弱光有利於形成愈傷組織及愈傷組織的增長。而短光照對愈傷組織誘導率又有利。胚壯體的分化則相反，在強光，長光照的條件下有利於胚壯體的分化。試驗以12—14

  6 培養基的滲透壓與PH  在G培養基上進行不同PH值對愈傷組織形成的影響試驗，結果以5.5—6.0PH值為宜。

  7 試管苗移栽及生長狀況

       試管苗移栽以每年的3月—4月為好，也可根據具體形狀而定，幼苗出瓶後，先洗去培養基，再栽植到蛭石或稻殼灰+園田土（1：1）；粗沙+園田土（1：3）。栽植密度為2厘米～3厘米**～6厘米，移栽完畢澆透水，並用0.1％百菌清，多菌靈噴霧保苗，在合理的管理條件下，試管苗可以直接栽培到田間土壤裏。

      移栽後最重要的是保持其相對濕度在85％以上，並注意通氣和溫度的管理。

試管苗首次移栽1周後，可施些追肥，視苗大小而定，濃度逐漸由0.1％到0.3％左右，肥料種類有複合肥，尿素，磷酸二氫甲，MS培養液，以及餅肥水等。通常7天到10天噴一次殺菌濟。試管第二次移栽後，管理上不可放鬆，須注意除草，施肥防治病蟲害並及時 掐去頂芽，尤其是花蕾，以促進側芽的生長，以促使苗早日壯大，待試管苗出瓶2個月左右，即可上盆，並按常規方法進行水肥管理。