食品微生物檢測實驗室質量控製規範（6）
錄入時間:2010-9-17 9:50:35
來源：互聯網
附錄A (規範性附錄) （等同 EA-04/10 APPENDIX C）
參考培養物的一般性使用
來源於權威機構認可的參考菌株
禁止
參考原株
低溫幹燥，液氮儲藏，超低溫冷凍等
特定條件和被推薦的儲存時間
在特定條件下保存
繼代培養一次
解凍
工作菌株
特定條件和被推薦的儲存時間
日常使用
* 同時進行合適的純度檢查和生化鑒定
上述過程的所有步驟都應形成文件，並保留所有步驟的詳實記錄
附錄B （資料性附錄）(USA/FSIS MLG CHAPTER 36)
儀器設備的校正、維護及使用驗證
B.1 簡介(USA/FSIS MLG CHAPTER 36.1)
儀器設備的維護、校正及使用驗證涉及到測試設備及分析儀器的標準，也包括了監測及控製環境條件如衛生、安全及廢棄有害物的指南。在本方法中也涉及到分析食品中特定微生物、物種及殘留物的質量控製參數。
食品微生物檢驗實驗室的負責人保證參與實驗操作的每個人的質量保證及質量控製程序一致。質量保證主管每年一次執行內部審核以確保程序的符合性。
必須記錄與預期質量控製結果有出入的情況，並由負責分析的人員驗證，需通知單位主管。不一致的地方要記錄在日誌裏，並附上采取的矯正的措施。單位主管的責任是每周看一次日誌。每天的驗證記錄指的是正常工作日，如果某一項儀器未被使用，標簽與記錄都要如此標示。非工作日（周末、假期）也要標注。
B.1.1設備手冊(USA/FSIS MLG CHAPTER 36.11)
a. 所有儀器設備手冊要複印並且裝訂，存於容易取放的地方。
b. 本章沒有涉及到的測試設備，要複印其操作程序、維護的說明書並放在設備附近。
B.1.2設備記錄(USA/FSIS MLG CHAPTER 36.12)
a. 每台儀器要配記錄本並放在其附近。記錄本的內容包括：設備名稱、製造廠商、主機係列號或其他獨特信息、收到及應用日期、放置地點、收到時的狀態（新、舊、重新調試、）製造廠商的操作指南（複印件或其放置位置）、設備維護或校正的日期、維護細節及未來的維護計劃、任何損傷、故障、修正、修理的記錄。
b.有關儀器的每項操作都要記錄在案，包括日期、事件、操作、使用人等。
c. 所有儀器記錄本要在最後使用日期後保存3年。
B.2控溫設備(USA/FSIS MLG CHAPTER 36.2)
B.2.1 滅菌鍋(USA/FSIS MLG CHAPTER 36.21)
B.2.1.1 溫度校正及驗證
a. 所有滅菌鍋在啟用時校正，每日用溫度計校正以保證其穩定性。
b. 為驗證滅菌鍋性能，每次滅菌時應記錄溫度、時間。
c. 記錄表明滅菌鍋的編號、日期、產品、運行號碼、滅菌起止時間、在預定溫度的時間。
d. 記錄末端由操作員確定產品或物質的滅菌時間及溫度符合標準程序。
B.2.1.2 操作
a. 操作手冊、每類加工物質的滅菌程序、設備記錄放在滅菌鍋附近。
b. 溫度敏感的滅菌帶或類似物，放在所有滅菌鍋容器內以證實操作有效。
c. 隔離手套或類似物要始終放在滅菌鍋附近。
B.2.1.3 維護
a. 每台滅菌鍋使用6個月後由專業人員維護。另外，每台滅菌鍋每年要用認可的溫度計進行溫度確認實驗及溫度一致性檢驗。
b. 滅菌鍋蒸氣管的濾器要每周檢查清洗。
c. 滅菌鍋要保持幹淨，無殘留物以保證最大熱傳導。
d. 日誌為每台滅菌鍋記錄所有操作及溫度驗證。
e. 主管每周檢查日誌以確保記錄準確、完整。
B.2.2 培養箱(USA/FSIS MLG CHAPTER 36.22)
B.2.2.1 溫度校正及驗證
a. 每台儀器啟用時校正溫度的準確性及一致性。
b. 為驗證儀器的性能，用專用設備（溫度計等）每日上午、下午記錄溫度。
c. 不一致的溫度要記錄在日誌上，並寫明原因及采取的措施。
B.2.2.2 操作
a．培養箱要放在環境溫度差異小的地方。
b．箱式培養箱溫差範圍±1℃，連續式培養箱溫差範圍±2℃。
B.2.2.3 維護
a. 每年清潔兩次，防止黴菌或其他微生物累積。
b. 每年檢查一次培養箱的墊圈、風扇等設施。所有的維護、修理記錄在案。
c. 若需要加水以保持濕度，可加入非揮發性的微生物抑製劑，防止細菌生長，容器要每月清洗消毒。
B.2.3 水浴鍋(USA/FSIS MLG CHAPTER 36.23)
B.2.3.1 溫度校正及驗證
a. 每台儀器啟用時校正溫度的準確性及一致性。
b. 為驗證儀器的性能，溫度計要放在水浴鍋上或加熱槽上，記錄使用時的溫度。
c．水浴鍋應有內置的水循環係統及蓋子，溫差控製在±0.5℃ 。每次使用時檢查溫度。
d．微生物學應用中的大多數加熱槽有內置熱循環儀，可調節溫度從環境溫度到115±0.5℃。加熱槽的溫度要每天測量記錄。
B.2.3.2 操作
a．根據廠商的要求操作水浴鍋或加熱槽。
b．精確控溫時，保證溫度計不與儀器邊緣接觸。
B.2.2.3 維護
a．所有水浴鍋每月至少清空清潔一次。
b．所有的維護、性能偏差及采取的相應措施要記錄在案。
B.2.4 冰箱及冰櫃(USA/FSIS MLG CHAPTER 36.24)
B.2.4.1 溫度校正及驗證
a. 所有的冰箱及冰櫃在安裝時校正溫度的準確性及一致性。
b. 為驗證儀器的性能，分析人員每天用標準溫度計測定記錄溫度。
B.2.4.2 操作
a．冰櫃溫度應保持在低於-10℃。
b．超低溫冰櫃溫度應保持在低於-70℃或-90℃。
c．冰箱溫度應保持在2~8℃
B.2.4.3 維護
a. 每台冰箱、冰櫃的門墊圈、風扇每月檢查一次，配備日誌。日誌記錄預定的維護日期、遇到的問題及采取的措施。
b. 冰箱、冰櫃至少每年一次除霜、清潔、消毒。
c. 以下程序適用於超低溫冰箱，但不排除針對個別冰櫃加入其他的清潔/維護措施：
1. 空氣濾器/盤管每季度檢查清潔一次。
2. 應及時清理門墊圈及封條上的冰。應更換冰霜覆蓋了三十天內的封條。
3. 隻有在冰箱修理時才進行盒子內部的除霜及清潔工作。
B.2 5 幹燥箱(USA/FSIS MLG CHAPTER 36.25)
B.2.5.1 溫度校正及驗證
a. 所有的幹燥箱在安裝時校正溫度的準確性及一致性。
b. 為驗證儀器的性能，分析人員每天或在使用時用認可的儀表測定記錄溫度。
B.2.5.2 操作
a．幹燥箱內的物品要分隔好以保證熱穿透性好。
b．按照廠商的說明操作。
c．隨時至少放一付隔熱手套或類似物在幹燥箱附近。
B.2.5.3 維護
a. 幹燥箱至少每年清潔消毒一次。
b. 幹燥箱全部的狀況（乳門墊圈，門插銷、加熱棒等）每年檢查一次。
c. 所有的維護、性能偏差及采取的相應措施要記錄在案。
B.3 測量設備(USA/FSIS MLG CHAPTER 36.3)
B.3.1 實驗室天平的校正及驗證(USA/FSIS MLG CHAPTER 36.31)
a. 所有的天平每年用經認可的標準砝碼校正。
b. 為驗證儀器性能，使用前用單個砝碼在指定範圍內測定質量記錄數據。
B.3.1.1 操作
a. 天平要放在堅固的表麵上，避免傾斜及震動。
b. 天平和任何其他的稱重設備及附件要放在幹淨、幹燥的地方。這點對於分析天平尤為重要。
c. 蒸發皿或特殊稱量紙可用於稱重。避免溢出及形成氣溶膠。
d. 所有的天平，其尖端負荷及分析，對於預計的目的是敏感度適當的。
e. 若天平配有矯正儀，在使用前確保天平處於水平。
B.3.1.2 維護
a. 所有的天平每年至少進行一次專業清洗，並每年用認可的標準砝碼校正。
b. 天平每次使用後要清潔。
c. 日誌為每台天平記錄日常使用情況、所有的清潔、維護、性能偏差及采取的矯正措施。
B.3.2酸度計的校正及驗證(USA/FSIS MLG CHAPTER 36.32)
a. 為驗證酸度計的性能，每天用標準緩衝液校正。若一天內間隔用酸度計讀數，每次使用前用新配製的緩衝液重新校正。
b. 用包括測試物質的pH範圍的兩種標準溶液校正儀器。（如pH4.0和7.0以及pH7.0和10.0。
c. 確保應用前，能按照廠商說明書中提到的校正可接受的標準，記錄所有的校正信息。
B.3.2.1 操作
a. 用於校正的部分緩衝液使用後丟棄。
b. 校正溫度要接近於測試溶液的溫度。測定pH的理想溫度範圍是20-30℃。利用溫度補償計較好，或根據廠商說明進行溫度校正。
c. 參考緩衝液要標記上鑒定編號，收到日期及終止日期。
B.3.2.2 維護
a. 所有的酸度計每年由專業人員保養。校正/保養證書是必要的。
b. 每次使用後清理電極。電極按照廠商說明保存。電極切勿幹燥。
c. 每台酸度計配有日誌。日誌記錄每次使用、變換電極或緩衝液及保養的日期。儀器性能偏差及采取的矯正措施要記錄在案。
B.3.3水活性（aw）的校正及驗證(USA/FSIS MLG CHAPTER 36.33)
按照廠商操作手冊的說明進行校正、維護及測試實驗。
B.3.3.1 操作
a. 測試方法及程序參考USDA FSIS 《Microbiological Laboratory Guideline（3rd ,1998）》中的第2章。
b. 溫度在測定aw時很重要，溫度的微小變化會引起蒸氣壓的較大變化。因此，儀器、參考鹽溶液以及樣品應保持同一溫度。
c. 測完後，樣品不應留在儀器中。上樣時應避免滴入儀器中。
d. 為確保讀數準確，上樣體積不應超過一次性杯子的一半。
e. 在放入儀器之前，將杯子邊緣的樣品擦掉以防汙染。若有溢出，需擦掉並重新校正儀器。
B.3.3.2 維護
a. 按照說明書，水動力學工具的傳感器應至少每年檢查一次。任何時候，若標準鹽溶液的測定值與預期值相差很大，檢查傳感器。若有問題，丟棄不用或者返回廠家重校。
b. 保存日誌，記錄使用日期，所有的維修，標準鹽溶液的讀數，所有的性能偏差及采取的矯正措施。
B.3.4微量加樣器的校正及驗證(USA/FSIS MLG CHAPTER 36.34)
a. 加樣體積每月用質量/體積測定方法校正。以下為如何滿足質量/體積標準的例子。
單容量加樣器 在特定體積（μL）5次/mg。
多容量加樣器 在低，中，高體積（=20，50，100%最大體積）吸5次。記錄每次測定的平均值。
多通道加樣器 直觀的檢查放落，讀取累積數據。5次（在20，50，100%最大體積）。
b. 若性能驗證失敗，按照廠商說明書重新校正或返回廠商重新校正。
B.3.4.1 操作
a. 微量加樣器是精密儀器，小心使用和維護。
b. 按照廠商說明書使用。
c. 選擇合適的加樣器和吸管頭組合。
B.3.4.2 維護
a. 保持加樣器清潔，按照廠商說明書保存。
b. 記錄所有的維護、保養、校正及驗證測試。
B.3.5自動水泵/清洗設備/管形瓶填充物的校正及驗證(USA/FSIS MLG CHAPTER 36.35)
a. 若儀器用於分配指定體積，在安裝時用質量/體積測試方法進行校正。
b. 若取得體積一致，則通過每天的校正進行性能驗證。若體積有變化，必須每次使用時進行性能驗證。
B.3.5.1 操作
a. 若使用無菌介質，確保整個填充過程使用無菌操作技術。
b. 用鋁箔或類似物包裹滅菌物品。
B.3.2 維護
a. 所有設備每次使用後清潔消毒。
b. 儀器的所有設備狀況（如開關，軸，軟管等）每年檢查一次。所有的維護觀察、性能偏差及采取的矯正措施記錄在日誌裏。
B. 4顯微鏡的校正及驗證(USA/FSIS MLG CHAPTER 36.4)
所有的顯微鏡安裝時進行測微尺驗證，或要求供應商提供技術支持。
B. 4.1 操作
在使用及調整顯微鏡時按照廠商的說明書進行。
B. 4.2 維護
a. 每台顯微鏡每年由專業人員保養一次。
b. 每次使用後清潔目鏡及物鏡。
B. 5 自動化設備(USA/FSIS MLG CHAPTER 36.5)
a. 無人指導的操作，更需要每次按照儀器使用、維護、校正說明書進行操作。
b. 每台儀器按標準程序進行操作，保證儀器正常使用的維護及校正是必要的。
B.5.1分光光度計的校正及驗證
a. 所有的分光光度計在安裝時進行波長的校正。
b. 為驗證儀器性能，每天或每次使用前記錄空白對照的光吸收。
B.5.1.1 維護
根據廠商的建議清潔分光光度計。
B.5.2 液體比重計的校正
每年用化學複合物校正。
B.6 層流罩/生物危害櫃/安全櫃的校正與驗證(USA/FSIS MLG CHAPTER 36.6)
a. 生物安全櫃在安裝時及每年一次的保養。
b. 為驗證儀器性能，每次使用時利用開放培養基為對照檢查無菌性。除此之外，用適當的監控器每月檢查係統。
B.6.1維護
a. 每年保養一次層流罩//安全櫃。
b. 每次使用後清潔消毒。
B.7 離心設備(USA/FSIS MLG CHAPTER 36.7)
a. 專業技術人員每年保養離心設備。實驗室每月清潔消毒離心機。
b. 超速離心機的轉子每年維護一次。
B.8 參考標準的跟蹤測定及校正(USA/FSIS MLG CHAPTER 36.8)
設備 要求 頻率
校正溫度計* 校正標準重驗證 5年一次
參考熱電偶 沸點及冰點 1年一次
工作溫度計 校正標準示蹤校正 1年一次
工作熱電偶 校正標準示蹤校正或參考熱電偶 1年一次
砝碼* 校正標準砝碼的重驗證 5年一次
天平 校正標準示蹤校正 1年一次
定時器 國家標準 1年一次
玻璃定量容器 質量，示蹤校正標準砝碼 1年一次
滅菌鍋 示蹤溫度計或熱電偶校正標準 1年一次
*所有溫度計及砝碼的校正參考國家/國際標準，如NIST或者SI。
B.9 微生物學補充用品(USA/FSIS MLG CHAPTER 36.9)
B.9.1 消耗品
微生物學的消耗品包括在測試方法中應用，用後即丟棄的物品，包括但不局限於一次性吸管頭、培養皿、解剖刀、稱量紙、包裝袋以及在測試中用到的其他物品。這些物品必須幹淨、無菌、精確。實驗室可通過廠商的說明書滿足要求。實驗室要保存這些證書。
B.9.2 可重複使用產品
實驗室的可重複使用產品指在檢驗分析中應用，隨後清洗滅菌可繼續使用的物品。包括但不局限於玻璃管、試管、手套、塑料服裝、不鏽鋼儀器、攪拌機、刀等其他物質。經清潔、滅菌的物品要做好標簽，切割器具可在用前清洗、燒烤、滅菌。
B.9.3 參考培養物（材料）
被鑒定的參考培養物（CRC）必須可溯源至國家或國際公認的模式菌株收藏中心（如ATCC）。來源於實驗室的參考培養物（RC）必須對照著標準參考菌株進行鑒定，應保證以上參考培養物有完整的生化活性和生理特征。所有的CRC和RC從原始菌株轉接次數不得超過5次。第5次轉移後，實驗室要從模式菌株收藏中心購買新的參考培養物，或使用國家或國際公認的參考菌株重新鑒定培養物的生化、生理學特性。另一種方法是，典型培養物可以生長，然後冷凍幹燥或冷凍保存以周期性應用，這樣可以延長重新購買或者重新鑒定的期限。保存菌株培養物需按照特定程序進行。為了質量控製，傳代次數不能超過5次。可以應用可溯源至ATCC的商業凍幹菌株。應詳細記錄每批培養基的鑒定及用此培養基分析樣品的情況。
B.9.4 蒸餾水（實驗室純度級）
a. 隻有去除痕量溶解金屬、細菌、抑製化合物的水方可用於配製培養基、試劑及稀釋空白。無抑製劑的水被稱為微生物適用水。以下的實驗可確保水無抑製劑。
下列參數的記錄要保存：
每周測定（或使用前測定）：25℃大於1.0兆歐姆/cm的電阻。
每月測定：所有殘餘氯小於0.01mg/L；
菌落總數小於1000cfu/ml
每年測定：重金屬（Cd，Cr，Cu，Ni，Pb，Zn，）單獨小於0.05mg/L。
重金屬總量小於10mg/L。
b. 蒸餾器根據廠商建議清潔。
B.10 實驗室維護要求(USA/FSIS MLG CHAPTER 36.10)
B.10.1工作台麵
a. 測定樣品或開始工作前，必須用我國衛生部門和我國環保機構認可的清潔劑（消毒劑）徹底清潔台麵。工作結束（樣品製備、接種、轉移）或當天工作結束後，台麵再清潔消毒。
b. 處理致病性物質時，用70%的乙醇，70-90%的異丙醇或EPA認可的商業消毒劑，根據廠商建議濃度使用。若有被肉毒梭菌（Clostridium botulinum）汙染的可能性，調節70%的乙醇或者次氯酸鹽溶液調節pH至11.0。
c. 在做抗生素殘留測試的地方，隻用普通酒精避免酚或次氯酸鹽溶液的隨機汙染。
B.10.2生物危害性物質
a. 所有物質用後立即置於廠商建議濃度的消毒液中，或直接扔到危害袋中。所有物質在121℃持續滅菌至少45分鍾。
b. 滅菌後丟棄所有器具。應符合我國的環保法規。
B.11 非一致性的設備(USA/FSIS MLG CHAPTER 36.11)
所有的設備要正確維護。任何儀器，若出現過量或者錯誤操作，或者測定結果可疑，或者儀器缺陷，都應不被使用。設備應及時檢定，若有可能，應放在特定地方，直到修理好，其校正、驗證實驗及測試實驗表現正常。實驗室應檢查該項目在以前的測試結果中的缺陷問題。
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