日本-霍亂大腸杆菌分離培養基

日本災後衛生檢驗產品-霍亂大腸杆菌分離培養基

一、構成（每升培養基）

酵母提取物…………………………………5g

細菌用腖……………………………………10g

硫代硫酸鈉…………………………………10g

檸檬酸鈉……………………………………10g

牛膽汁酸……………………………………8g

蔗糖…………………………………………20g

氯化鈉………………………………………10g

檸檬酸二鐵…………………………………1g
溴百裏酚蘭（BTB溶液）……………………0.04g

TB溶液 ………………………………………0.04g

瓊脂……………………………………………14g

 

二、製作方法

將88g本品溶解在1L純淨水中，製成懸浮液，並加熱至沸騰，然後將瓊脂完全溶解其中。注意，本培養基不可經過高壓蒸汽殺菌。冷卻至50℃後，分別盛在淺盤裏。

 

三、用途及特點

Kobayashi、enomoto、sakazaki和kuwahara等以nakanishi的選擇分離瓊脂培養基為基礎，開發出了TCBS培養基。

本培養基的構成與kobayashi等的構成基本一樣，但包含了經過特殊處理的牛的膽汁，改良了kobayashi與nakanishi等指出的不足。

由於本培養基的構成複雜，因此很難維持統一的發育標準。通過幾個調查發現，不同廠家製造的TCBS培養基之間存在差別，不穩定因素。

通常，抑製腸內細菌的同時，對其部分同類不產生抑製的行為非常重要，因此，來自生產公司的質量管理顯得尤為重要。West等試驗證明，oxoid公司的TCBS培養基基本可以滿足他們的產品標準。

WHO設定了由TCBS培養基中檢出Vibrio類的最低適用標準。

本培養基適合vibrio choleae、v.parahaemolyticus等幾乎所有vibrio類的發育。

幾乎所有糞便中的腸內細菌都可以被抑製24小時。Proteus類以及streptococcus faecalis稍微有些發育，但是很容易區分出這些菌落與vibrio類菌落的不同。

本培養基不需要任何添加物或者血液無菌添加。因此，比起滅菌後仍需添加物的硫酸lauryl亞碲酸瓊脂培養基，本培養基有很多優點。另外，比起亞碲酸培養基，本培養基具備適合vibrio類菌發育的特點。本培養基在阻止vibrio類菌之外的細菌發育的同時，在35℃環境下培養一晚可以促進病原弧菌屬的迅速發育。從化學環境中分析其他vibrio類需要在更低溫20~30℃的環境下培養。

TCBS培養基上成長的菌落形態

35℃環境下培養24小時後

一部分的aeromonas hydrophila發育成長為黃色菌落，而plesiomonas shigelloides通常通常情況下不發育。

方法

在本培養基表麵塗抹糞便，或者由增菌培養基（如堿腖水）中塗抹。如果是臨床檢驗，需要在35℃下培養18~24小時，如果是環境材料，需要在稍微低溫環境下培養。

本培養基的培養結果顯示，觀察由培養器中取出的試驗品，發現黃色的菌落就是弧菌群。例如，如果將v.chorela在室溫下放置，會變回到綠色。

保存方法和使用期限

保存在30℃的幹燥環境下，在使用期限內使用。製作的培養基需要保存在2~8℃溫度下。

 

四、質量管理

陽性控製

Vibrio furnissii nctc 11218（非病原性）

陰性控製

Escherchia coli atcc 25922

 

五、注意事項

TCBS培養基上的各種vibrio類的鑒別屬於推測，為了進一步證實，需要進行追加試驗。

TCBS培養基上的黃色菌落不能進行氧化酶生化反應。由TCBS培養基釣菌出來的菌落有粘稠性，很難發生滑動凝集反應。進行滑動凝集反應之前，需要進行普通瓊脂培養基的二次培養。