4 種測定化妝品菌落總數培養基的質量比較

隨著化妝品使用越來越廣泛。已成為人們日常生活中的必需品。開展化妝品衛生質量監測。是保障人民健康維護消費者的利益，如使用了細菌總數超標的化妝品。會導致皮膚感染 。因此，化妝品細菌總數測定是便於判明樣品被汙染的程度。是對樣品進行衛生學評價的重要依據 。按國家衛生部頒布《化妝品衛生規範》，卵磷脂、吐溫 8 0營養瓊脂培養基是用於測定化妝品菌落總數的培養基。

現在生產培養基的廠家很多，為了解不同廠家生產的卵磷脂、吐溫8 0營養瓊脂培養基 質量，對 4種培養基進行比較 。現將結果報告如下 。 

1 材料與方法

1.1實驗菌株

大腸埃希菌 ( ATCC  25922 )，金黃色葡萄球菌 ( ATCC 6538) 。 

1.2 培養基

卵磷脂、吐溫80營養瓊脂培養基分別購自杭州天和微生物試劑有限公司．北京陸橋技術有限責任公司 ．廣東環凱微生物科技有限公司等3種幹燥培養基，編號為1、2、3號 ，幹燥培養基按產品說明書配製，均在有效期內使用。自配卵磷脂、吐溫8 0營養瓊脂培養基，由本實驗室參照文獻方法配製。其蛋白腖采用日本進口材料，自配培養基編號為4號，共4種卵磷脂、吐溫 8 0營養瓊脂培養基。 

1.3試劑

0.5％氯化三苯四氮唑 (TTC ) 121℃ 2 0min高壓滅菌，備用。 

1.4實驗方法

1.4.1菌液的準備

取大腸埃希菌、金黃色葡萄球菌分別接種營養肉湯管。在37 ℃培 養 1 8 ～ 2 4 h。 

1.4.2稀釋培養基並接種

將培養好的大腸埃希菌、金黃色葡萄球菌兩種肉湯管用生理鹽水10倍稀釋 ，從10^-1到l 0^-7。選用平板上菌落數在5 0～1 0 0 c f u之間的稀釋度，然後取稀釋好菌懸液 1ml置入無菌平 皿，傾注加入0.5％TTC的卵磷脂、吐溫8 0營養瓊脂，每個平板1 5-2 0ml ，每種培養基接種3個平板。待凝固後將平板翻轉置 3 7 ℃培養 4 8 h取出觀察結果．並以每種培養基的 3個平板菌落平均數為各檢測數進行比較，試驗重複5次。 

1.4.3實驗室室內質量控製  用菌落計數方法，取大腸埃希菌肉湯培養管用生理鹽水10倍稀 釋，從 10^-1到10^-7，吸取10菌懸液1ml注入無菌平板。共接種3個平板，然後將已溶解的營養瓊脂傾注平板 。混勻，待凝固置37℃培養48 h後作菌落計數，連續進行10次。將所得結果標入質量控製圖。 

2   結 果

2.1  4種培養基大腸埃希菌的計數比較

4種培養基對大腸埃希菌進行5次菌落計數重複試驗，結果顯示各種培養基的菌落大小與數量基本一致．差異無統計學意義 ( F=0.257，P>0.05) 。見表 1 。 

 

 

2.2   4種培養基對金黃色葡萄球菌細菌總數計數

連續進行5次實驗，結果顯示各種培養基的菌落大小與數量基本一致，差異無統計學意義 ( F= 0.066，P>0.05 )： 見表 2 。 

表 2   4種培養基金黃色葡萄球菌生長菌落數比較

2.3實驗室室內質量控製

連續 1 0次菌落計數，測定值在 4.3×106—9.66×10⁶之間，平均值為6.94×10⁶cf u／ml 。s=1.74×10⁶cf u／ml 。1 0次測定值均在`x±2 s範 圍 內 ，達到實驗室內部控製標準要求。 

3   討 論

實驗表明，在4種不同廠家生產的卵磷脂、吐溫 80營養瓊脂培養基上，大腸埃希菌、金黃色葡萄球菌的生長速度、菌落形態與數量無明顯差別 ，各種培養基的軟硬度、pH值等理化指標符合質量要求，差異無統計學意義。但在透明度上自配的卵磷脂、吐溫80營養瓊脂培養基較其他3種幹燥培養基清晰透明，而3種幹燥培養基配製的平板較混濁可能是由於培養基的原材料不同的關係。自配培養基用的是日本進口蛋白腖，其顏色偏淺 。蛋白腖是由蛋白質 (如酪蛋白、纖維蛋白)經酶或酸堿分解而成。由於蛋白質的來源和消化程度不同，因而製得的腖質量相差很大，就是同一廠家不同批號的蛋白腖質量也會有差異，所以是否這樣配製出來的培養基的透明度就有所不同。實驗室室內質量控製是保證實驗室檢驗結果準確 性的必要基礎。為確保本次實驗結果的準確性與可靠性，我們對實驗結果進行控製，繪製質量控製圖 ，結果顯示，l 0次菌落總數測定值在4.3×10⁶—9.66×10⁶之間，均在允許誤差範圍，實驗結果在`x±2 s之內 ，未發現失控現象，從實驗穩定、重複性好 ，表明本次培養基的實驗結果是可信的 。 

近年，幹燥培養基使用越來越廣泛，培養基的質量關係到微生物實驗室檢測工作的成效 。因此 ，開展微生物培養基的質控工作十分必要。 目前，我國生產培養基的廠家很多，然而各廠家配製培養基的所采用配方有不同 ，有國家標準， 或是行業標準 。在製做方法上也各有異。如這次實驗用的卵磷脂 、吐溫 8 0營養瓊脂培養基裏的吐溫8 0試劑 ，有些廠家 產品是在使用該培養基時才加吐溫8 0。還有4號瓊脂培養基，有些廠家生產幹燥培養基是在製備4號瓊脂平板時加入亞碲酸鉀及慶大黴素，而有的廠家將亞碲酸鉀、慶大黴素已經加進幹燥培養基裏，兩種方法配製出來的4號瓊脂平板顏色就不一樣。現在的商品培養基還存在一些問題，如培養基包裝不規範，沒有標明生產日期及有效期限，包裝標簽說明沒列出培養基的配方，還有的產品質檢報告不規範等，幹燥培養基的生產由於原料來源不同容易出現這樣或那樣的問題。因此．商品培養基的生產質量要提高，不斷完善，要更加規範化、標準化 。據文獻介紹，實驗室不得使用不符合要求的培養基。所以 ，在購買幹燥培養基時 ，應選擇技術力量強、性能穩定、通過質量管理體係認證企業的產品，而且不要經常更換廠家生產，以避免試驗中出現使用不生產商的產品所造成的誤差，同時，無論自製還是商業提供 培養基都需要按《 商業性微生物培養基質量檢驗規範》進行質量控製，使用高質量的培養 基，才能保證微生物檢驗結果的準確、公正、可靠 。