《水生微生物實驗法》——著色菌屬或稱紅硫菌屬的分離與純化培養

（十五）著色菌屬或稱紅硫菌屬的分離與純化培養

著色細菌與綠菌屬一樣也是光合細菌，但它們除了含有葉綠素外，還含有胡羅卜素，而且後者占優勢。其細胞除球形外．有柱狀，偶有彎曲有莢膜及極生鞭毛，能運動，細胞團塊呈深淺不一的紅色或紫紅色。在有硫化氫條件下生長時，能氧化硫化氫與硫，累積硫於細胞內，而綠色硫細菌卻沉硫於細胞外。分布在有腐爛藻類植物的海泥和淡水泥中。

1 .分離培養基成分及其配製

由於此種完全培養基的有些成分不能在高壓滅菌．或在高溫下不相容必須先製備好基礎培養基，然後把其他成分的無菌溶液加到冷基礎培養基中。

（1）基礎培養基

NH₄Cl    0.1 克

KH₂PO₄    0.1 克

MgCl₂    0.05克

NaCl   海生種30 克

淡水種10克

瓊脂     20克

水    925毫升

溶解以上無機鹽於水中，加入瓊脂，加熱至121℃ 15分鍾，使瓊脂溶解，分裝於試管或螺旋口瓶裏．121 ℃ 蒸汽下滅菌15分鍾。不加瓊脂可作為液體培養基。

（2）無菌碳酸氛鈉溶液：將NaHCO3  5克加水至100 毫升，在121℃ 蒸汽下滅菌15 分鍾。

（3）無菌硫化鈉溶液：此液既作為HS^-的來源，又起脫氧劑作用，若是預先配製，必須把它保存在沒有氧的密閉容器裏，否則應在臨用前配製。

取Na₂S·9H₂O 5克加水至100 毫升，在121 ℃ 蒸汽下滅菌15分鍾．

（4）完全培養基：

基礎培養基（融化冷至45 ℃ ）   10毫升

NaHCO₃溶液   0.4毫升

Na₂S·9H₂O    0.2 毫升

依次無菌地如到基礎培養基中，混勻後可用。

2. 分離與純化培養

（1）分離培養：在廣口玻璃瓶底放一層0.5-1厘米厚的混有腐爛海藻的海泥，用海水覆蓋，暴露於光下。直至培養器最靠近光源的壁上長出紅色菌為止。這些紅色生長物通常含有著色菌．它的生長決定於泥中硫酸鹽的還原，和隨後釋放的H₂S 。

（2）純化培養

① 深層試管法：

a 、選取具有著色菌特征的紅色生長物（已用顯微鏡檢查過細胞形態），放於一定量的完全培養液中，混勻。

b ．準備一係列深層融化的完全培養基管，並保存在45 ℃ 水溶中，將混勻於培養液中的生長物稀釋成一係列稀釋度。

c ．每支試管用經160 ℃ 滅菌1 小時的固體石蠟和液體石蠟1:1 的混合物覆蓋，每管蓋2 厘米高。

d ．曝光於25-28 ℃ 下培養，3-7 天後完全分開的紅色菌落出現在較高的稀釋度裏。選擇一支合適的試管培養物表麵滅菌，切斷玻璃，移去管子，然後在無菌的培養皿裏，以無菌操作法把菌落解剖出來。

e. 在無菌的完全培養基裏乳化菌落，並在一係列稀釋度中重複以上操作培養，保證純度。

純培養物可在這些深層瓊脂裏保存，2 個月移種一次。

② 瓊脂培養基劃線法：將紅色生長物在完全培養基平板上劃線接種，於厭氧條件下曝光25-28℃，培養4-7天．挑出典型菌落，重新劃線培養，直到純化為止。純化後可保存在深層完全培養基中．

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