《水生微生物實驗法》——水生微生物的分離與純化（3）

（三）無菌水、無菌海水和陳海水的製作

1．無菌水或無菌海水

據稀釋倍數需要，以5-8 支小試管為一組，分別裝入9毫升（滅菌時會蒸發成少於9 毫升，要酌情增加）蒸餾水或海水，塞好棉塞，各組用牛皮紙和紗繩包紮好．放入鐵絲筐；滅菌後取出冷卻備用。

2 ．陳海水

製作海洋細菌培養基或稀釋海水樣品時，用陳海水或人工海水，效果較好。其方法、原理如下：

（1）用玻璃瓶（而不用重金屬瓶，因重金屬瓶由於它們的離子易與細菌細胞蛋白質結合而使其變性，或與其酶的-SH 基結合．使它失活，故有殺菌作用，不宜采舊）取不被陸上汙染的海水。

（2）使用濾孔適中的玻璃濾板過濾．棄掉其中特殊物質，以求其成分一致。若用細菌過濾器過濾．必須在濾液中加一點生海水，保證其中尚有一些細菌，以便分解過濾海水中的有機物。

（3）放置冷暗處幾個星期即成（有光地方會使其中能進行、光合作用的生物生長）。幾星期後，其中的殺菌成分隨著時間而減少．這要比有機物的被分解、減少更重要。所用的陳海水鹽度須與檢查區（站）的鹽度大體一致。

（四）平板和斜麵培養基製備

1.斜麵培養基製作

將滅菌後的裝有培養基的試管，趁熱將其上部墊於木棒上成適當的斜度，培養基的斜麵不占至試管長的2 / 3 ，切勿使培養基沾著棉花塞，冷凝後即成斜麵。製成的斜麵培養基的麵上以有少量凝結釋出水者為佳。

 2 ．平板培養基製作

( l ）將儲備培養基加熱融化。

( 2 ）待冷至45 ℃ ，按無菌操作法倒入已滅菌的培養皿，每皿倒15-20毫升（約2-3 毫米厚），放在平台或桌麵上，冷凝後即成平板培養基．供劃線分離、塗板、鑒定、觀察菌落、計數等用。

（五）營養瓊脂培養基、2216E 培養基和特殊用途培養基的製備

（1）成分如下：

蛋白腖10 克

牛肉浸膏3 克

氯化鈉5 克

瓊脂 5-18 克

蒸餾水1000 毫升

pH7.0-7.2

( 2 ）製法：稱取上述成分按次序溶解於900毫升水中，加熱促進溶解，不斷攬拌，直至全部溶解，加水至1000毫升．調pH ，過濾，去沉澱．分裝於玻璃容器，經121℃ 蒸汽壓力鍋滅菌20分鍾後，存於冷暗處備用。

2 ．2216E 培養基

上述培養基適用於檢驗淡水中的細菌總數。至於計數海洋樣品中好氣異養細菌培養基可用佐貝爾創造的2216E 培養基。其成分如下：

陳海水1000毫升

蛋白腖5 克

酵母膏1 克

FePO₄  0.01克

瓊脂15 克

pH 7.6 -7.8

配製法同前培養基。

3 ．專用培養基製備

它們的化學成分頗多，製備步驟稍繁。如上述適用於分離大腸杆菌群及腸道病原菌的鑒定培養基—— 伊紅-美藍( E.M.B ）培養基。

( 1 ）成分如下：

蛋白腖10克

乳糖10 克

K₂HPO₄ 2 克

瓊脂20克

蒸餾水l000毫升

2% 伊紅水溶液20 毫升

0.5%美藍水溶液13 毫升

( 2 ）製法如下：

① 在20 克瓊脂中加蒸餾水至800 毫升。

② 加熱使溶解，不斷地攪拌．

③ 加磷酸氫二鉀和蛋白腖，使溶解混勻。

④ 補充蒸餾水，使溶液體積達900 毫升。

⑤ 調pH 為7.2-7.4

⑥ 趁熱用脫脂棉或絨布過濾，去沉澱。

⑦ 定量（100 毫升或150毫升）分裝於錐形瓶內。

 ⑧ 塞好棉塞，棉塞及瓶頸用牛皮紙包好，用紗繩紮牢。

⑨ 在115 ℃ 高壓蒸汽鍋內滅菌20 分鍾後，儲於咭處備用。

⑩ 乳糖另在100 毫升蒸餾水中溶解，於112.6 ℃ 蒸汽滅菌10 分鍾，以免在上述溫度和壓力下使乳糖受到破壞，影響實驗效果。

11將上述儲備培養基加熱熔化，按比例加入乳糖溶液．

12據瓶內培養基容量，用無菌移液管按比例吸一定量已滅菌2%伊紅水溶液及0.5 %美藍水溶液加入已熔化的儲備培養基中，充分混勻（防止產生氣泡），製成平板培養基，置於冰箱備用。

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