微生物純培養的獲得

微生物在自然界中不僅分布很廣，而且都是混雜地生活在一起。要想研究或利用某一種微生物，必須把它眾混雜的微生物類群分離出來，以得到隻含有一種微生物的培養。微生物學中將在實驗條件下，從一個細胞或同種細胞群繁殖得到的後代稱為純培養。純培養的獲得有下列幾種方法。

一、平板劃線分離法

    有接種環以菌操作沾取少許待分離的材料，在無菌平板表麵進行平行劃線、扇形劃線或其他形式的連續劃線，微生物細胞數量將隨著劃線次數的增加而減少，並逐步分散開來，如果劃線適宜的話，微生物能一一分散，經培養後，可在平板表麵得到單菌落。

二、稀釋倒平板法

    先將待分離的材料用無菌水作一係列的稀釋（如 1 ∶ 10 、 1 ∶ 100 、 1 ∶ 1000 、 1 ∶ 10000 …），然後分別取不同稀釋液少許，與已溶化並冷卻至 45 ℃左右的瓊脂培養基混合，搖勻後，傾入滅過菌的培養皿中，待瓊脂凝固後，製成可能含菌的瓊脂平板，保溫培養一定時間即可出出菌落。如果稀釋得當，在平板表麵或瓊脂培養基中就可出現分散的單個菌落，這個菌落可能就是由一個細菌細胞繁殖形成的。隨後挑取該單個菌落，或重複以上操作數次，便可得到純培養。

三、單孢子或單細胞分離法

    采取顯微分離法從混雜群體中直接分離單個細胞或單個個體進行培養以獲得純培養，稱為單細胞（單孢子）分離法。單細胞他離法的難度與細胞或個體的大小成反比，較大的微生物如藻類、原生動物較容易，個體較小的細菌則較難。在顯微鏡下使用單孢子分離器進行機械操作，挑取單孢子或單細胞進行培養。也可以采用特製的毛細管在載玻片的瓊脂塗層上選取單孢子並切割下來，然後移到合適的培養基進行培養。單細胞分離法對操作技術有比較高的要求，多限於高度專業化的科學研究中采用。

四、利用選擇性培養基分離法

    各種微生物對不同的化學試劑、染料、抗生素等具有不同的抵抗能力，利用這些特性可配製合適某種微生物而限製其它微生物生長的選擇培養基，用它來培養微生物以獲得純培養。

    另外，還可以將樣品預處理，消除不希望分離到的微生物。如加溫殺死營養菌體而保留芽孢，過濾去除絲狀菌體而保留單孢子。

微生物純培養分離方法的比較