1.培養基配方的選定
同一種培養基的配方在不同著作中常會有某些差別。因此，除所用的是標準方法，應嚴格按其規定進行配製外．一般均應盡量收集有關資料．加以比較核對．再依據自己的使用目的加以選用，記錄其來源。
2 ．培養基的製備記錄
每次製備培養基均應有記錄，包括培養推各稱，配方及其來源．和各種成份的牌號。最終pH 值、消毒的溫度和時間製各的日期和製備者等，記錄應複製一份，原記錄保存備查，複製記錄隨製好的培養基一同存放、以防發生混亂。
3.培養基成分的稱取
培養基的各種成分必須精確稱取並要注意防止錯亂．最好一次完成，不要中斷。可將配方置於傍側，每稱完一種成分即在配方上做出記號，並將所需稱取的藥品一次取齊，置於左側，每種稱取完畢後，即移放於右側。完全稱取完畢後．還應進行一次檢查。
4.培養基各成份的混合和溶化
培養基所用化學藥品均應是化學純的。使用的蒸煮鍋不得為銅鍋或鐵鍋，以防有微量銅或鐵混入培養基中，使細菌不易生長。最好使用不鏽鋼鍋加熱溶化．也可放入大燒杯或大燒瓶中置高壓蒸汽滅菌器或流動蒸汽消毒器中蒸煮溶化。在鍋中溶化時、可先用溫水加熱並隨時擾動，以防焦化、如發現有焦化現象、該培養基即不能使用，應重新製備。待大部分固體成分溶化後，再用較小火力使所有成分完全溶化．迄至煮沸。如為瓊脂培養基，應先用一部分水將瓊脂溶化，用另一部分水溶化其它成分，然後將兩溶液充分混合。在加熱溶化過程中，因蒸發而丟失的水分，最後必須加以補足。
5.培養塞pH 的初步調整
培養基各成分完全溶解後，應進行pH 的初步調正，因培養基在加熱消毒過程中、pH 會有所變化，例如，牛肉浸液約可降低pH0.2.而腸浸液pH 卻會有顯著的升高。因此，對這個步驟，操作者應隨時注意探索經驗、以期能掌握培養基的最終pH ，保證培養基的質量。pH 調正後，還應將培養基煮沸數分鍾，以利培養基沉澱物的析出。
6．培養基的過濾澄清
液體培養基必須絕對澄清，瓊脂培養基也應透明無顯著沉澱，因此，須要采用過濾或其它澄清方法以達到此項要求。一般液體培養基可用濾紙過濾法，濾紙應拆疊成折扇成漏鬥形，以避免因液壓不均勻而引起濾紙破裂。
瓊脂培養基可用清潔的白色薄絨布趁熱過濾。亦可用中間夾有薄層吸水棉的雙層紗布過濾。新製肉、肝、血和土豆等浸液時、則須先用絨布將碎渣濾去，再用濾紙反複過濾。如過濾法不能達到澄清要求、則須用蛋清澄清法。即將冷卻至55
若能自行沉澱者，亦可靜置冰箱中1-2日、吸取其上清液即可。
7.培養基的分裝
培養基的分裝，應按使用的目的和要求，分裝於試管、燒瓶等適當容器內。分裝量不得超過容器裝盛量的2/ 3 。容器口可用墊有防濕紙的棉塞封堵，其外還雙用防水紙包紮（現試管一般多有用螺旋蓋者）。分裝時最好能使用半自動或電動的定量分裝器。分裝瓊脂抖麵培養基時，分裝量應以能形成2 / 3 底層和1/ 3 斜麵的量為恰當。分裝容器應予先清洗幹淨並經幹烤消毒，以利於培養基的徹底滅菌。每批培養基應另外分裝20ml 培養基於一小玻瓶中，隨該批培養基同時滅菌，以為測定該批培養基最終pH之用。
8.培養基的滅菌
一般培養基可采用
某些畏熱成分，如糖類，應另行配成20% 如或更高的濃液，以過濾或間歇滅菌法消毒，以後再用無菌操作技術、定量加於培養基。明膠培養基亦應用較低溫度滅菌。血液、體液和抗生素等則應從無菌操作技術抽取和加入於經冷卻約
瓊脂斜麵培養基應在滅菌後立即取出、待冷至55
9. 培養基的質量測試
每批培養基製備好以後．應仔細檢查一遍：如發現破裂、水分浸入、色澤異常、棉塞被培養基沾染等、均應挑出棄去。並測定其最終pH。
將全部培養基放入36±
用有關的標準菌株接種1-2 管或瓶培養基，培養24- 48 小時，如無菌生長或生長不好。應追查原因並重複接種一次，如結果仍同前，則該批培養基即應棄去，不能使用。
10.培養基的保存
培養基應存放於冷暗處，最好能放於普通冰箱內。放置時間不宜超過一周，傾注的平板培養基不宜超過3天。每批培養基均必須附有該批培養基製各記錄副頁或明顯標簽。
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