革蘭陰性杆菌分離培養基——弧菌分離培養基

[用途]

用於霍亂弧菌分離培養

[配法]

蛋白腖10g ，氯化鈉5g，牛肉膏3g ，脂20g ，蒸餾水1L 。

將前4 種成分混合於水中，加熱溶解，校正pH 至8.4 ，分裝後121℃ 滅菌15min ，傾注平板。

[用法]

凡急性患有水樣便標本做增菌培養的同時，應直接取標本接種到堿性瓊脂平板或亞碲酸鉀瓊脂平板上。置35 ℃ 培養12-16h ，觀察結果。霍亂弧菌生長較快，菌落大而扁平，呈青灰色，半透明，光滑濕潤。在亞碲酸鉀瓊脂上菌落呈灰黑色。 [質量控製]

各實驗室凡自配培養基或商品培養基，在使用前可用標準菌株生長對照，臨床實驗室可送防疫部門所設立的專門檢驗機構進行目的菌監測，質量可靠者方可使用。

EL-Tor弧菌生長良好；大腸埃希菌ATCC25922 生長抑製。

［保存］

置4℃ 冰箱，1 周內用完

2 堿性膽鹽瓊脂

[用途]

用於霍亂弧菌分離培養

[配法]

蛋白腖10g ，牛肉膏5g，氯化納5 -10g ，瓊脂20g，膽鹽（牛、豬）2.5g，蒸餾水1L。 將上述成分稱量混合於水中加熱溶解，校正pH 至8.4 ，分裝121 ℃ 滅菌15min ，傾注平板。

[用法]

取糞便標本或增菌培養物1 接種環接種平板，置35 ℃ 溫箱培養16-18h 。霍亂弧菌迅速生長，其它細菌生長較緩慢。在16-18h 後，霍亂弧菌的菌落，直徑可達2mm左右，呈扁平，青灰色，半透明，光滑濕潤，易挑起。其它細菌菌落小而凸起，不透明，或有色素。

[質量控製]

同堿性瓊脂

[保存］

置冰箱，1 周內用完。

3 慶大黴素瓊脂

[用途］

用於霍亂弧菌分離培養。

[ 配法]

蛋白腖10g ，牛肉浸膏3g ，氯化鈉g，構椽酸鈉10g，無水亞硫酸鈉3g ，蔗糖（或白糖）10g ，瓊脂15-20g 慶大黴素、多粘菌素B “雙抗液”2 ml，蒸餾水1L 。

將上述成分（除“雙抗液”外）稱量混合於水中，加熱溶解，校正pH 至8.4 ，分裝滅菌121 ℃ 15 min ，待冷卻至50 ℃ 後，每100ml內加“雙抗液”0.2ml，另加5g / L 亞碲酸鉀溶液0.1ml，再傾注平板。最後每毫升培養基內含有慶大黴素0.5U ，多粘菌素B6U 。

[用法]

將糞便標本或增菌培養物劃線接種到該平板上，置35 ℃ 培養16-18h。

由於該培養基抑製性強，其它非弧菌科細菌被抑製，而霍亂弧菌生長迅速，16h 菌落可達2mm，菌落青灰色半透明，扁平，光滑濕潤。若培養時間長，菌落略黃色、隆起，中心厚而不透明。

[質量控製]

霍亂弧菌（小川、稻葉）生長良好，培養18-24h 菌落直徑2.5-3.0mm；大腸埃希菌和變形杆菌生長抑製。

[保存］

置4 ℃ 冰箱內，1 周內用完。

注：

（1）該培養基國內有商品出售，多數產品已加入慶大黴素，使用時，應詳閱說明書。

（2）“雙抗液”配製：98ml 工滅菌蒸餾水中加慶大黴素（25 000U / ml）1ml，多粘菌B 或抗敵E ( 300 000U / ml）1ml4 ℃ 冰箱保存，1 月用完。

4 四號瓊脂

[用途］

用於霍亂弧菌分離培養

［配法］

蛋白腖10g ，氯化鈉5g，牛肉浸膏3g ，亞硫酸鈉（無水）3g ，枸椽酸鈉10g ，豬膽汁粉5g，十二烷硫酸鈉20g，利凡諾（雷佛奴爾）3g ，瓊脂粉12g ，慶大黴素亞碲酸鉀混合液1ml，蒸餾水1L。

將前8種成分放入玻璃或搪瓷容器內（嚴禁用鋁製容器等金屬容器），加入蒸餾水，加熱溶解混合後，調整至pH8.0 ，然後按12%加入瓊脂，煮沸至瓊脂溶化後，冷至60 ℃ 左右，按每100ml瓊脂加入慶大黴素亞碲酸鉀混合液（1ml 40 000U 慶大黴素加79ml蒸餾水混合後，加入0.8g 亞碲酸鉀溶解混合即成，每毫升含500U 慶大黴素和10g / L 亞碲酸鉀）0.1ml，搖勻，傾注平板。

[用法]

取待檢標本劃線接種平板，置35 ℃ 培養過夜。

8h 後即可初步觀察結果。24h 培養後，霍亂弧菌呈中心黑色、較大而扁平的菌落。

[質量控製]

配成的培養基呈亮黃色透明；EL-Tor弧菌稻葉型生長良好；EL-Tor弧菌小川型生長良好；大腸埃希菌ATCC25922 抑製生長。

注：

（1）慶大和亞碲酸鉀混合液應新鮮配製並置冰箱保存。

（2）雷佛奴爾應避光保存，而且每批均應預試後方可使用。成品培養基應避光保存。

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